161849. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16886 antibiotikumok előállítására
27 161849 28 minta felvitele után az oszlopot acetonitril-víz (7:3) rendszerrel eluáljuk, 5 ml/perc átfolyási sebesség mellett. A legaktívabb frakciókat egyesítjük, vákuumban szárazra pároljuk és liofilizáljuk. Az így nyert anyag az I és II faktorok monoammóniumsóinak keveréke; felhasználható a fentiekben meghatározott baktériumellenes és anthelmintikus meghatározásokra, továbbá az ezután említendő elválasztási és tisztítási eljárásokra. 19, példa: Az A16886 antibiotikum I és II faktora monoammóniumsóinak elválasztása 10 g, 18. példában előállított anyagot 197 ml acetonitril-víz (55:45) elegyben oldunk és 4,0 cmxl30 cm-es, acetonitril-víz (7:3) eleggyel készített, 1,6 liter mikrokristályos cellulózt (Avicel-t) tartalmazó oszlopra visszük fel. A felvitelt 1 ml/perc, az acetonitril-víz (7:3) eleggyel történő eluciót pedig 2 ml/perc sebességgel végezzük. Az eluciót értékméréssel és papírkromatográfiával követjük. Az elució eredménye egy olyan frakciósorozat, melynek legtöbb tagja csak az egyik faktort tartalmazza. A megfelelő faktorokat tartalmazó frakcióikat összeöntjük és liofilizáljuk. 20. példa: Az A16886 antibiotikum hidrokloridjának előállítása Az előző példák szerinti eljárásokkal készített és elválasztott A16886 antibiotikum monoammóniumsó 200 mg-ját 2 ml vízben oldjuk. Az oldat kezdeti pH-ja 5,30; ezt 1 N sósavat adagolva 2,0-re állítjuk, és csökkentett nyomáson majdnem szárazra pároljuk. 0,5 ml vizet és 1,5 ml metanolt adunk hozzá, és a kívánt hidrokloridsót 10 térfogat acetonnal kicsapva nyerjük. A kicsapott A16886 antibiotikum hidrokloridot leszűrjük, acetonnal mossuk, és szárítjuk. Az analízis 4,50% klórt mutat. A terméket 66%-os dimetilformamid-víz elegyes oldatban, 5,0 kezdeti pH-értéken elektrometrikusan titrálva három titrálható csoport jelenléte adódik: pK'ai s= 3j8, pK'a<> = ßy2 és pK'a3 = = 10,8. 21. példa: Az A16886 antibiotikum dinátriumsójának előállítása Az előző példák alapján előállított és elválasztott A16886 antibiotikum monoammóniumsójának 200 mg-ját 2 ml vízben oldjuk. A kezdeti pH 5,30. Az oldatot ezután 2,5 N nátriumhidroxiddal 10,50 pH-értékre állítjuk, majd csökkentett nyomáson csaknem szárazra pároljuk. 1,5 ml metanolt adunk hozzá, és a sót 10 térfogat acetonnal kicsapjuk. Az A16886 antibiotikum dinátriumsó csapadékot leszűrjük, acetonnal mossuk, majd szárítjuk. Az analízis 5 6,79% nátriumot mutat. 22. példa: Az A16886 antibiotikum előállítása sav alakban 10 200 mg A16886I és A16886II antibiotikumok monoammóniumsóinak elegyét 40 ml vízben oldj.uk és 6 ml Dowex 50W—X12 (H+) gyantát (gyártja Dow Chemical Co.) adunk hozzá. Az 15 elegyet 30 percig keverjük, majd zsugorított üvegszűrőn leszűrjük, és a szürletet (pH 2,65) liofilizáljuk. 66%-os dimetilformamid-víz elegyben 4,30-as 20 kezdeti pH-n elektrometrikusan titrálva három titrálható csoport jelenléte mutatható ki: pK'ai=4,2, ,pK'a2 —5,6 és ,pK'a 3 =10;4. 25 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás A16886I és/vagy A16886II antibiotikum vagy ezek gyógyászatilag alkalmazható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy Strep-30 tomyces clavuligerus NRRL 3585 törzset tenyésztünk, asszdimiiáliható széntforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett körülmények között, a tenyészetből az antibiotikumot kinyerjük (és azlt 35 adott esetben sóvá alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a táptalajt 25 és 37 °C közötti hőmérsékleten tartjuk, és a törzs növesztését kb. 36—72 óráig folytatjuk. 40 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinjti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az említett tenyészetből az A16886I antibiotikumot nyerjük ki, melynek monoammóniumsója fehé-45 res, pelyhes, amorf szilárd anyag, amely 190 és 300 °C közötti hőmérsékleten lágyul, miközben színe sötétbarnává alakul; igen jól oldódik vízben, gyengén rövidszénláncú alifás alkoholokban, acetonitrilben pedig oldhatatlan; 60 amfoter jellegű, és négy titrálható csoporttal rendelkezik, melyeknek pK'-értékei: pK'ai — = 4,1, pK'a2 5=5,2, pK'a 3 =9,3 és pK'a 4 = 10,5; átlagos molekulasúlya titrálási adatokból meghatározva 530; átlagos összetétele 40,26% szén, 55 5,91% hidrogén, 13,98% nitrogén, 33,37% oxigén és 7,21% kén; fajlagos optikai forgatóképessége Dcr]2 ^ = +153,6° (C=l s/tf% vízben); ásványolajban infravörös abszorpciós spektruma a következő, hullámhosszaknál mu-60 tat jellemző sávot («-ban kifejezve): 3,10, 5,68, 6,30, 6,60, 7,20, 7,60, 8,83, 9,35, 9,60, 9,85, 11,60 és 12,90. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az 65 említett tenyészetből az A16886II antibiotiku-14
