161849. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16886 antibiotikumok előállítására

161849 21 22 Az A16886 antibiotikum termelésének feltetelei süllyesztett, aerob tenyésztési körülmények. Viszonylag kis mennyiség előállítására rázólombik vagy edényben felületi tenyészet használható; nagy tételek előállítására, süllyesztett aerob tenyészetek előnyösek steril fermentorban. A steril fermentorban a táptalajt olthatjuk spóraszuszpenzióval; azonban a növekedés késése miatt, amely spóraszuszpenzióval történő inokuláláskor észlelhető, előnyös vegetatív alakkal oltani. így a lag-szakasz lerövidülésével a fermentációs berendezést gazdaságosabban lehet kihasználni. Ennek megfelelően először egy vegetatív inokulumot kell készíteni, melyet úgy állítunk elő, hogy egy relatíve kis mennyiségű táptalajt az organizmus spóráival oltunk be; és amikor fiatal, aktív vegetatív inokulum keletkezett, ezzel sterilen inokuláljuk a nagy fermentort. A vegetatív inokulum készítésére használt táptalaj megegyezhet az A16886 antibiotikum nagy mennyiségben történő előállítására alkalmazott táptalajjal, de más is lehet. Az A16886 antibiotikumot termelő organiztartományban növekszik. Optimális A16886 termus 25 és 37 °C közötti, széles hőmérsékletmelés 26—30 °C-on érhető el. Általában, maximális A16886 termelés az inokulálástól számított 36—72 óra alatt érhető el. Mint ahogy az aerob, süllyesztett fermentációknál szokásos, a táptalajon steril levegőt buborékoltatunk át. Az organizmus jó növekedéséhez és az A16886 antibiotikum termeléséhez a fermentorban felhasznált levegő mennyisége 0,2—0,4 térfogat/perc/tenyészettérfogat. Az előnyös levegőmennyiség 0,40 térfogat levegő/perc/ tenyészettérfogat. A íermentlében az antibiotikum koncentrációja könnyen követhető a fermentáció során, a táptalaj mintáinak gátló aktivitását valamilyen, az A16886 antibiotikum jelenlétében ismerten gátolt organizmussal vizsgálva. Ilyen célokra az E. coli, Salmonella gallinarium és Pseudomonas sonalacearum törzseket találtuk alkalmasnak. A minták vizsgálata a jól ismert turbidimetriás vagy lemezes módszerrel történik. Általában a maximális A16886 termelés az inokulálástól számított 1—3 napon belül következik be, süllyesztett aerob tenyészetben vagy rázatott lombikokban. Az A16886 fermentáció során keletkezett antibiotikum aktivitás főleg a fermentleben van. Ennek megfelelően az A16886 antibiotikum termelése során alkalmazott izolálási eljárások az antibiotikum maximális kitermelését teszik lehetővé a táptalajból. így például a micéliumot és az oldhatatlan anyagokat hagyományos módszerekkel, pl. szűréssel vagy centrifugálással eltávolítjuk a fermentléből, és az A18888 antibiotikum a szűrt vagy centrifugált fermentléből extrakciót vagy adszorpciós technikái alkalmazva nyelhető ki. Az A16886 adszorpciós technikával történő kinyerésére különböző adszorbensek és ioncserélőgyanták használhatók, pl. szén, szilikagéi, alumíniumoxid, mikrokristályos cellulóz és ioncserélő gyanták. A fermentáció során keletkezett A16886 antibiotikum a fermentációs körülményektől függően amfoter vagy só alakban lehet. A formától függetlenül, egy megfelelő oldószeres oldatból adszorbeálható egy fenti, vagy ahhoz hasonló adszorbensen. Az adszorbeált A16886 antibiotikumot vagy sóját azután szokásos eluciós technikával, pl. az adszorbenst, amely megköti az A16886 antibiotikumot vagv sóját, oldószerrel mosva eluálhatjuk. Ha az eluciót pl. ammóniumformát- vagy nátriumacetátoldattal mosva végezzük, az eljárás során az A16886 antibiotikumot megfelelően ammóniumvagy nátriumsóként eluáljuk. Ezeket a sókat azután a hagyományos módszerekkel könnyen visszaalakíthatjuk az A1S883 antibiotikummá Az A16886 antibiotikum sóit az ammónium-és alkálifémsók kivételével inkább úgy állítjuk elő, hogy az A16886 változatlan amfoter alakját a megfelelő savval vagy bázissal a szokásos módon reagáltatjuk. így savaddiciós sók készítéséhez az A16886 antibiotikumot savval reagáltatjuk. Alkalmas sav pl. a sósav, hidrogénbromid, hidrogénjodid, kénsav, foszforsav, ecetsav, benzoesav, szulfaminsav, borkősav, citromsav, rnaleinsav, borostyánk ősav, aszkorbinsaM glikolsav. Ugyancsak alkot az A16886 antibiotikum kationokkal is sókat, az A16886 változatlan amfoter alakját bázisokkal és sókkal reagáltatva. Ilyen sók pl. az ammónium- és szubsztituált ammóniumsók; alkálifémsók, pl. nátrium-, kálium-, litium-, cézium- és rubidiumsók; az alkáliföldfémsók. pl. kalcium-, stroncium- és báriumsók; valamint a réz-, cink-, magnéziumos ezüstsók. Szerves bázisok esetén a bázis milyensége nem kritikus, bár előnyös 3,0 pH feletti vizes oldata. Ilyen alkalmazható bázis pl. a benzilamin. metilamin, dielilamin, trietilamin, prokain, diizopropilamin, etanolamin, ciklohexilamin, diciklohexilamin, di-n-butilamin, kinolin vagy a piridilamin. Az A16886 antibiotikum gyógyászatilag alkalmazható sói előnyösek gyógyászati adagolásra. Ezenkívül az összes só használatos az A16886 antibiotikum termelése, elválasztása és tisztítása során közbenső termékként'. Terápiai célokra a gyógyászatilag alkalmazható sók általában egyenértékűek az A16886 antibiotikummal, sőt egyes sók különösen előnyösek valamilyen előnyös tulajdonságuk, pl. oldhatóságuk miatt, amely a sóképző csoport következtében oldódik. A találmány szerinti eljárás részletesebb ismertetésére a következő példákat adjuk'meg: 10. példa: A16886 antibiotikum rázólombikban történő előállítása 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 fiO 11