161732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenol-formaldehid gyantakomplexeiből történő kinyerésére
11 161732 12 Az egyesített tömény vizes oldatot szálmentesre szűrjük, PH értékét 4,0—4,5-re állítjuk és tízszeres térfogat acetont öntünk hozzá. Az acetont előbb zavarosodásig, majd további részletekben adagolj uk a tömény oldathoz, 10 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten másnapig állni hagyjuk. A kivált kristályokat zsugorított üvegszűrőn összegyűjtjük, majd acetonnal mossuk és levegő átszívatásával szárítjuk. A kristályos anyag nedvességtartalmát 8—12% közé állítjuk. Nyeredék: 9,10 g kristályos hidroxokobalamin klorid. A termék azonosítását és tartalmi meghatározását British Pharmacopoeia 1968 „Hydroxocobalamin" c. cikkelye (475. oldal) szerint végezzük. Hidroxokobalamin szulfát, acetát, vagy bázis előállítása is a fentiek szerint történik, azzal a különbséggel, hogy a hatóanyagot tartalmazó, 1:4 térfogiatarányú fenol-kloroformos oldatot fél térfogat 0,05 n H2 S0 4 -el, vagy 0,1 n CH :! COOH-al, ill. 0,1 n NaOH-al rázzuk össze. A kirázáshoz használt savas ill. lúgos oldat célszerű megválasztásával a kívánt hidroxokobalamin terméket lehet előállítani. 9. példa 41,0 g megszárított és elporított, NaNC>2 jelenlétében feltárt és derített fermentléből fenol-formaldehid gyantával leválasztott Bi2C -vitamin-fenol-formaldehid gyantaikomplexhez, mely összesen 151,8 mg Bi2C -vitamint tartalmaz, 240 ml leoldó folyadékot adunk. A leoldó folyadékot úgy készítjük el, hogy 400 ml 0,1% NaNC>2-et tartalmazó vizes oldat pn értékét jégecettel 4,2-re állítjuk, majd 100 ml acetont öntünk hozzá. Ebből 240 ml-t öntünk a rózsaszínű csapadékhoz. Két óráig tartó keverés után szívószűrőre öntjük és a szűrőn maradt anyagot a maradék oldószer eleggyel mossuk. A szűrletként nyert sötétvörös oldatban térfogatára számított 40 isúiy% kb. 200 g ammonszulfátot oldunk, majd az oldatot választótölcsérbe öntjük. Az alsó színtelen vizes oldatot leengedjük, a felső kib. 130 ml acetonos oldathoz 70 ml toluolt öntünk. Összerázás után a korrinoidok az újonnan kivált alsó vizes fázisba mennek át. A felső szerves oldószeres fázist kevés vízzel összerázzuk, majd a vizes kivonatokat egyesítjük és 50 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten csökkentett nyomáson kb. 40 ihl térfogatra bepároljuk. A koncentrátumot 50 ml-es mérőlombikba deszt. vízzel mennyiségileg átmossuk. Adott térfogatából meghatározzuk az oldat nitrito-kobalamin tartalmát, mely összesen 135 mg. Azonosságát papírkromatográfiásan, cianidmentes közegben nitrito-kobalamint standarddal kapott egyező elmozdulása alapján igazoljuk, tartalmi meghatározását pedig a British Pharmacopoeia 1968 „Hydroxocobalamin" c. cikkelyében (475. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer szerint végezzük. 10. példa 67,5 g száraz és porított, kromatográfiás elválasztásból fenol-formaldehid gyantával leváiasz-5 tott Bi2c-vitamin-fenol-formaldehid gyantakomplexhez, mely összesen 8,437 g B^c-vitamint tartalmaz, 600 ml acetont adunk. Fél óráig tartó keverés közben az aceton a komplexiből a fenolformaldeihid gyantát kioldja. Ezután a keveré-10 fcet szívószűrőre öntjük, majd a szűrőpapíron visszamaradó rózsaszínű kovaföldet acetonnal mossuk. A mosást addig ismételjük amíg a kezdetben sötétbarna szűrlet színtelen nem lesz. A Bi2c-vitamin tartalmú kovaföldet levegő át-15 szívatásisal megszárítjuk. Ezután kb. 600 ml deszt. vízzel a kovaföldi;ől a Bi2C -vitamint leoldjuk. Ha a lecsepegő szűrlet utolsó része még színes lenne, úgy a mosást kevés deszt. vízzel színtelenedésig tovább folytatjuk. A tömény vizes 20 oldatot rázótölcsérben, 2X200 ml 1:2 térfogatarányú fenol-kloroformmal kivonatoljuk, és az alsó szerves oldószeres fázis leengedése után 120 ml 1:4 térfogatarányú fenol-kloroform elegygyel összerázzuk. A Bi2C -vitamint ezáltal meny-25 nyiségileg a szerves oldószer elegybe vittük át. Ezután 550 ml kloroformot, 600 ml acetont, 200 ml deszt. vizet adunk az elegyhez és összerázzuk. Rövid idő múlva az elegy két fázisra válik szét. A felső vizes fázis töményen tartalmaz-30 za a hatóanyagot. A két fázis elválasztása után az alsó szerves oldószeres fázist újból kivonatoljuk 150 ml deszt. vízzel. 35 Az egyesített vizes kivonatokat szálmentesre szűrjük és nyolcszoros térfogatú acetont öntünk hozzá. Az acetont előbb zavarosodásig, majd több részletben adagoljuk a tömény oldathoz és más-40 napig 10 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált kristályokat zsugorított üvegszűrőn összegyűjtjük, acetonnal mossuk, és levegő átszívatásával szárítjuk. A kristályokat üvegpohárban 50 ml 0,3% NaNC-2 tartalmú, jég-45 ecettel pH 5 értékre állított desztillált vízzel forrás hőmérsékletéig melegítve feloldjuk. Az oldatot másnapig jégszekrényben, 5 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten tartjuk. A kivált kristályokat zsugorított üvegszűrőn össze-50 gyűjtjük, kevés jeges vízzel lemossuk és megszárítjuk. , Nyeredék: 8,10 g kristályos Bi2c -vitamin. Az azonosságát papírkromatográfiásan, cianidmentes közegben, nitiito-kobalamin standarddal ka-55 pott egyező elmozdulása alapiján igazoljuk, tartalmi meghatározását pedig a British Pharmacopoeia 1968 „Hydroxocobalamin" c. cikkelyében (475. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer szerint végezzük. 11. példa 38,2 g száraz és porított, NaHSC>3 jelenlété-65 ben feltárt és derített fermentléből fenol-formal-6
