161732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenol-formaldehid gyantakomplexeiből történő kinyerésére

5 161732 6 pároljuk. A koncentrátum, korrinoid tartalmát papínkromatoigráfiás mennyiségi kiértékeléssel határozzuk meg. A korrinoid-fenal-formaldehid gyantakomplexből a korrinoidok kinyerhetők még az előbbiekhez hasonlóan úgy is, hogy a feldolgozásra kerülő korrinoid jellege szerint 0,1% ammónium-, alkáli- vagy földalkáliciianidot, -nitritet-, -rodanidot vagy -szulfitot tartalmazó, ill. adott esetben ezektől mentes, jégiecettel pH 4,0—4,5 értékre állított víz és 2—4 szénatomos alkohol elegyét adjuk a korrinoid-fenoil-formaldehid gyantakomplexhez. A keveréket homogenizálás után szűrjük. Tömény, jellemző színű, a korrinoidokat tartalmazó sötét ibolyiavörös koncentrátumot kapunk. A leoldásiból kapott oldatban 40'súly% ammonszulfátot oldunk. A vörös színezék rövid állás után mennyiségileg a felső, kis térfogatú alkoholos fázisba megy át, míg az alsó sós vizes fázis gyakorlatilag színtelen marad. Választótölcsérben a fázisokat elkülönítjük, majd a sötét színű alkoholos fázist V2 térfogat toluol hozzáadása után az előbbiek szerint dolgozzuk fel. Így a kiindulási térfogatra számítva 1/200—1/500 térfogatcsökkenés mellett olyan koncentrátumot kapunk, amely takarmánykiegészítők Bi2-vitamin komponenseként közvetlenül felhasználható, továbbá ebből szerves oldószerrel, előnyösen fenolkloroform eleggyel történő kizárással és ezt követő vizes kivonatolással önmagában ismert módon, aceton hozzáadása útján kristályos B-vitamint, hogy ennek bármely származékát állíthatjuk elő. A találmány szerinti eljárás másik előnyös foganatosítási módja szerint úgy járhatunk el, hogy a korrinoid-fenol-formaldehid gyantakomlexhez acetont adunk, amely a komplexből a gyantát kioldja. A keveréket szívószűrőre öntjük, majd a visszamaradó rózsaszínű kovaföldet, melyre a korrinoidok mennyiségilég rácsapódtak, kevés acetonnal átmossuk. A mosást addig ismételjük, amíg a kezdetben sötétbarna szűrilet színtelén nem lesz. A kovaföldet szobahőmérsékleten megszárítjuk, majd szitáljuk. A nyert termék korrinoid tartalmát papírkromatográfiás mennyiségi kiértékeléssel határozzuk meg és a takarmánykiegészítők Bi2-vitamin komponenseként közvetlenül felhasználhatjuk. Ha viszont a hordozóról a korrinoidokat vízzel, vizes alkohollal vagy alifás ketonok vizes elegyével leoldjuk, akkor a nyert koncentrátum a kristályos korrinoidok kinyerésén kívül takarmánykiegészítők felerősítésére is alkalmas. A találmány szerinti eljárás további változata a koirrinoid-fenol-formaldehid gyantakomplex feloldását ismerteti fenol és klórozott alifás szénihidrogén elegyónek alkalmazásával. A komplex megbontását ebből az oldószeres közegből végezhetjük el, amely során a gyantapolimer a kétfázisú rendszerben, amikor is vizet és szerves oldószert használunk, a szerves oldószeres fázisban marad, míg a korrinvázas vegyületek töményen a vizes oldatba mennek át. A találmány szerinti eljárás részleteit az alábbi példák szemléltetik: 5 1. példa: 240 g száraz és porított, metanobakteriumos fermentációbóíl fenol-formaldehid gyantával leválasztott korrinoid-fenol-forinaldehid gyanta-10 komplexhez, mely papírkromatográfiás meghatározás szerint a kísérő egyéb korrinoidok mellett összesen 461 mg B12-Vitamint tartalmaz, 1 liter acetont adunk. Két óráig tartó keverés közben az aceton a komplexből a fenol-formaldehid 15 gyantát kioldja. Ezután a keveréket szívószűrőre öntjük, majd a szűrőn maradt szilárd anyagot acetonnal mossuk. A mosást addig ismételjük, amíg a kezdetben sötétbarna szűrlet színtelen nem lesz. A Bi2-vitamin tartalmú kovaföldet szo-20 bahőmérsékleten megszárítjuk. Szitálás után homogén, rózsaszínű port kapunk, -melynek súlya 201 g. 1 g-os mennyiségéből leoldás, majd papírkro-25 matográfiás értékelés alapján Bi2-vitamin standardhoz viszonyítva meghatározzuk a Bi2-vitamin tartalmát, mely a kinyert anyagra vonatkoztatva összesen 436,5 mg. A meghatározást a British Pharmacopoeia 1968 „Cobalamin" c. cik-30 kelyében (262. oldal) szereplő „Coloured impurities" cím alatt leírt módszer szerint végezzük. A kapott termék takarmánykiegészítő komponenseként, mint Bi2-vitamin tartalmú koncentrátum, közvetlenül felhasználható. 2. példa 163 g nuccsnedves, metánobaktériumos fer-40 mentáció feldolgozási anyalúgjából fenol-formaldehid gyantával leválasztott korrinoid-fenol-formaldehid gyantakornplexhez, mely papírkromatográfiás meghatározás szerint a kísérő egyéb korrinoidok .mellett 401 mg B12-vitamint tartal-45 maz, 650 ml leoldófolyadékot adunk. A leoldófolyadékot úgy készítjük el, hogy 600 ml 0,1% nátriuímcianidot tartalmazó vizes oldat lúgos p^ értékét jégecettel pH

4,2nre állítjuk, majd 200 ml acetont öntünk hozzá. Ebből az oldatból 650 50 ml-t öntünk a rózsaszínű csiapadékhoz. Két óráig tartó keverés után szívószűrőre öntjük és a szűrőn maradt anyagot a maradék oldószere-léggyel átmossuk. A szűrletként nyert sötétvörös oldatban 40 súly %, kb. 320 g ammonszulfátot oldunk, 55 az; oldatot választótölcsérbe öntjük, majd az alsó vizes fázist leengedjük. A felső kb. 300 ml acetonps oldathoz 150 ml toluolt öntünk, összerázás után a korrinoidok az újonnan kivált alsó vizes fázisba mennék át. A szerves oldószeres 60 fázist kevés vízzel összerázzuk, -majd a vizes kivonatokat egyesítjük és 50 C°4ot meg nem haladó hőmérsékleten, csökkentett nyomáson kb. 80 mil térfogatra bepároljuk. A koncentrátum Bi2-vitamin tartalma Bi2-vitamin standardhoz 65 viszonyítva papírkromatográfiás mennyiségi 3