161709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin kinyerésére fermentlevekből
161709 9 10 8,0-ra lúgosítjuk attól függően, hogy savas, vagy lúgos alumíniumoxid mosására használjuk-e. A színes anyagokkal igen erősén szennyezett folyadékot az alumíniumoxidos kezelés előtt előnyösen ioncserélőgyanta-oszlopokon, pl. monofunkciós karboxil-kationcserélő polimergyantaoszlopon való előtisztításnak vetjük alá. A kobalaminokat a fenti, H-fázisú kationcserélőkkel 2,5—3,0 pH-jú közegben adszorbeálhatjuk, majd 10—12 pH-jú vizes^ammóniás oldattal eláljuk őket. Az így kapott lúgos eluátumból a színes szennyezőanyagokat a fenti módon távolítjuk el, ebben az esetben előnyösebb először lúgos és azután savas alumíniumoxidot használni. Az alumíniumoxiddal tisztított oldatot lúgos közegben káliumcianiddal vagy nátriumcianiddal ciánozzuk, majd rázó tölcsérben vagy extrahálókészülékben extrahálással tisztítjuk az oldatot. A kobalaminokat a ciánozott oldatból fenol/ széntetraklorid-eleggyel extraháljuk, majd az elkülönített szerves oldószerfázishoz butanolt és széntetrakloridot adunk és ebből az elegyből a kobalaminokat vízzel extraháljuk. Ezzel a kezeléssel elérjük azt, hogy a kobalaminok az oldatban feldúsulnak, és hogy a sók, fehérjék és egyéb szennyezőanyagok jelentős részét eltávolítjuk. A Bi2-vitamint és más kobalaiminokat tartalmazó kivonatot vákuumban csekély térfogatra besűrítjük, majd több térfogatrész acetonnal felhígítjuk. Az elegyet hideg helyen tartjuk, a rövid idő múlva kiváló csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A kapott, sötétvörös színű, vizes-acetonos oldatot alumíniumoxidoszlopon kromatografáljuk vizes acetonoldattal a Bi2-vitamin a kísérő kobalaminoktól való elválasztása céljából. A B-vitamint vizes acetonoldattal eluáljuk, majd több térfogatrész acetont adunk az eluátumhoz, és a B1 2-vitamint ebből az oldatból kristályosítjuk. Megjegyzendő, hogy a metánképző baktériumokat tartalmazó fermentlevek feldolgozásakor a Bi2-vitamin a hozzá közelálló kofoalamintól, a faktor Ill-tól való elválasztása speciális művelettel végezhető, mert az utóbbi nagyobb menynyiségben van jelen a szubsztrátumbain, és a szokásos kromatográfiás eljárásokkal nem lehet elválasztani. A Bi2-vitamin elválasztható a faktor III—tói alumíniumoxidon, való kromatografálással, azoldószerelegy olyan vizes acetonoldat, melynek sűrűsége d = 0,840—0,842 (81—80 súlyszázalék acetont tartalmazó oldat); a zónák éles szétválasztása után a Bi2-vitamint olyan vizes acetonoldattal eluáljuk, melynek sűrűsége d = 0,897— 0,900 (58—57 súlyszázalék acetont tartalmazó oldat). Ezt az eljárást a kobalaminok elegyének vizes-acetonos oldata kezelésére, valamint a faktor III-al szennyezett, kristályosított Bi2-vitamin termékek tisztítására használjuk. A Bi2-vitamin elkülönítésére vonatkozó eljárásunk szerint hidrolízissel szabaddá tesszük a kötött állapotban levő kobalaminokat, többek között a Bi2-vitamint is, és ezáltal a kívánt termék termelési hányada az ettől eltekintve azonos körülmények közötti előállításhoz képest nő. Néhány ismert, hidrolízises eljáráshoz képest a hidrolizátumból kinyert kobalaminok 5 mennyisége 30—110 százalékkal nő. Ez a klóramin B vagy a klórszukcinimid roncsolóanyagként való alkalmazásának köszönhető, amely a Bi2-vitamint termelő mikroorganizmusok sejtjeit gyorsan és erélyesen elbontja. 10 A hidrolízist vizes közegben, enyhe körülmények között végezzük. Könnyen beszerezhető reagensekkel dolgozunk. A hidrolízist általánosan használatos készülékben végezzük. Az eljárásunk szerinti hidrolízis tehát eredményes, ol-15 csón és egyszerűen megvalósítható. A Bi2-vitamin elkülönítésére vonatkozó találmányunk szerinti tisztítási művelet, melyben szorbensként tetszés szerinti sorrendben hasz-20 nálható savas és lúgos alumíniumoxid, lehetővé teszi a színes szennyezőanyagok egyszerű módon, és gyakorlatilag maradéktalanul való eltávolítását, és mindkét művelet vizes közegben végzendő. A savas és lúgos alumíniumoxid a vi-25 zes oldatokban levő színes szennyezőanyagokat igen jól adszorbeálja, és a pH-értéktől függően szelektíven adszorbeál, tehát az említett szorbensek képesek különböző típusú színes anyagokat szelektíve abszorbeálni. Ezek a szorbensek 30 nem kötik meg a Bi2-vitamint és az azt kísérő kobalaminokat, ezért ebben a lépésben jelentéktelen a Bi2-vitamin és a kobalamin-veszteség. A fenti szorbensek a kereskedelmi forgalomban levő', kromatográfiás minőségű alumíniumoxid-35 ból készíthetők 0,05 n káliumhidroxidoldattal vagy 0,2 n sósavval. Használat után a szorbensek könnyen regenerálhatok. A szükséges reagensek könnyen beszerezhetők, a szükséges készülék általánosan használatos típusú. A B12-VÍ-40 tamin elkülönítésére vonatkozó találmányunk szerinti eljárás tehát lehetővé teszi a szubsztrátum egyszerű módon való előtisztítását, a tisztítási művelettel járó veszteségek csökkentését, valamint a további tisztítási műveletek számá-45 nak a csökkentését, és a kívánt termék termelési hányadának növelését. A Bi2-vitamin elkülönítésére vonatkozó találmányunk szerint a hidrolízis és a fenti szorbensekkel való kezelés szerves oldószerek alkal-50 mazása nélkül végzendő, ezáltal biztonságosabbá és olcsóbbá válik a Bi2-vitamin nagyipari előállítása. A Bi2-vitamin elkülönítésére vonatkozó találmányunk szerinti eljárás lehetővé teszi azt, hogy 55 szükség esetén- a Bi2 -vitamint a faktor Ill-tól más lépések alkalmazása nélkül, közvetlenül a tisztított oldat alumíniumoxidon való kromatografálásával elválasszuk; oldószerelegyként olyan vizes acetonoldatot használunk, melynek sűrű-60 sége d = 0,840—0,842, majd a Bi2-vitamint olyan acetonoldattal eluáljuk, melynek sűrűsége d = 0,897—0,900. Ezáltal a faktor Hl-t tartalmazó folyadékok, pl. a metánképző baktériumok fermentleve feldolgozása lényegesen könyebbé vá-65 lik. 5
