161697. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) ciszepoxipropilfoszfonsav előállítására
11 161697 12 A hétnapos tenyészetből egykacsnyi mennyiségű sejttel oltottunk be egy 250 ml-es, három terelőlapos Erlenmeyer-lombikot, amely 40 ml alábbi összetételű inokulum-táptalajt tartalmazott: B) Inokulum-táptalaj kukoricakeményítő L-aszparagin DL-metionin mononátriumglutamát nátriuméi trát K2 HP0 4 CaCl2 .2H 2 0 MgS04 . 7H 2 0 CoCl2 . 6H2 0 FeS04 . 7H2 0 nyomelemek (az alábbiakban definiált módon)** pH = 7,0 ** Képlet, nyomelemek MnS04 . 4H2 0 CoCl2 . 6H2 0 H3BO3 ZnS04 . 7H 2 0 (NH4 )Mo 7 0 24 . 4H2 0 % % % % % % Mennyiség 2,0 % 0,5 0,1 0,1 0,4 0,1 0,05 0,02 % 0,01 % 0,001% mg/l 10 0,01 0,56 0,2 0,002 % Az inokulumot 28 °C-on tenyésztettük, kevertetés közben 48 órán át. 5 db 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk elő, amelyek mindegyike 30—30 ml alábbi összetételű termelő táptalajt tartalmazott: 15 20 25 MgS04 . 7H 2 0 0,02 % CuCl2 .2H 2 0 0,01% FeS04 . 7H2 0 0,001% nyomelemek (a fent definiált módon) pH = 7,0 Ezután vizes mononátriumglutamát-oldatot adagoltunk a lombikokhoz oly módon, hogy az 10 alábbi táblázatban feltüntetett mononátriumglutamát-végkoncentrációkat érjük el. Ezeket a lombikokat sterilizáltuk, lehűtöttük és 0,5 ml fenti módon előállított inokulummal oltottuk be. A beoltott lombikokat 28 °C-on inkubáltuk 72 órán át egy 220/perc sebességgel működő körrázógépen. Az egyes lombikok tartalmát centrifugáltuk, és a felülúszót dekantáltuk. A felülúszót ezután pH 8,0 0,05 M trizs-HCl-pufferrel hígítottuk és tesztorganizmusként Proteus vulgaris MB—838 alkalmazásával határoztuk meg. 72 órás inkubálás után a kapott fermentlevek meghatározási eredményei a következők: Adagolt mono-Táptalaj nátriumglutamát, gamma/ml millimól/1 antibiotikum alap termelő 0 alap termelő 0,6 30 alap termelő 3.0 alap termelő 6,0 alap termelő 12,0 10,8 10,4 19, R 18,4 22,3 C) Alap termelő táptalaj glukóz L-aszparagin DL-metionin nátriumcitrát K2 HP0 4 CaCl2 . 2H 2 0 Mennyiség 2,0 0,5 0,1 0,4 0,1 0,05 % % % % % % 35 4. példa A (-) cisz-l,2-epoxipropilíoszfonsav-termelést a 3. példában megadott módon hajtottuk végre. A következő kísérleti eredményeket kaptuk, ame-40 lyek különböző karbonsavsók adagolásának hatását mutatják be: Táptalaj Adagolt sav* alap termelő alap termelő alap termelő alap termelő alap termelő alap termelő alap termelő glutamát fumarát szukcinát alfa-ketoglutarát malát cisz-oxálacetát Mennyiség, Antibiotikum. mmól/1 <"g/ml 0 12,0 6,0 19,7 6,0 18,5 6,0 16,2 6,0 17,4 6,0 19,7 6,0 19,1 nátriumsó formában adagolva 5. példa 60 A (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav termelését a 3. példában megadott módon hajtottuk végre. A következő kísérleti eredményeket kaptuk, ".melyek különböző karbonsavaknak a fermen- 65 tációs táptalajhoz való adagolása hatását mutatják be — egyedül és glutaminsavval kombinálva — az antibiotikum-termelésre. A mikroorganizmus növekedését a lombikokban úgy mértük, mint a micélium száraz súlyát 1 ml fermentiere vonatkoztatva.
