161695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) cisz-1,2-epocipropilfoszfonsav előállítására
161695 ammóniumsó ezután szilárd alakban nyerhető ki úgy, hogy a butanolos oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Egy másik megoldás szerint az ammóniumsó vízzel extrahálható a butanolos oldatból; így a (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav ammóniumsójának vizes oldatát kapjuk. Az antibiotikum kalcíumsóját úgy állítjuk elő, hogy az ammóniumsó vizes oldatához kalcíumhidroxidot adunk és a kapott oldatot csökkentett nyomáson melegítjük. Egy másik megoldás szerint a kalciumsót úgy is előállíthatjuk, hogy az antibiotikum egy másik sója oldatát egy kalciumciklusban levő kationcserélő gyantán vezetjük át. A kalciumsó a 10 mg/ml koncentrációjú vizes oldatból állás közben vagy keverés hatására kikristályosodik. A szabad sav fehér kristályos szilárd anyag, amely 170 °C-on elbomlik. A (-) cisz-l,2-epoxipropüfoszfonsav és sói hasznos mikrobás ágensek, amelyek egyaránt használhatók mind a Gram-pozitív, mind a Gram-negatív patogén baktériumok növekedésének gátlásában. Ez az antibiotikum és különösen sói aktívak patogén Bacillus-, Escherichia-, Staphylococcus-, Salmonella- és Proteus-félékkel és ezek antibiotikum-rezisztens törzseivel szemben. Az ilyen patogének jellemző képviselői az alábbiak: Escherichia coli, Salmonella schottmuelleri, Salmonella gallinarum, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii és Staphylococcus aureus. Így a (-) cisz-l,2-epoxipropílfoszfonsav és sói antiszeptikus ágensként használhatók érzékeny organizmusoknak gyógyszerészeti, fogászati és orvosi berendezésről való eltávolítására, valamint az ilyen mikroorganizmusokkal való fertőzésnek kitett más területekről való eltávolítására. Ugyancsak használhatók bizonyos mikroorganizmusoknak mikroorganizmus-keverékekből való kiválasztására. A (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav sói ugyancsak hasznosak a baktériumos fertőzések által emberben és állatban kiváltott betegségek kezelésében és különösen azért értékesek ilyen vonatkozásban, mivel aktívak rezisztens patogéntörzsekkel szemben. Ezek a sók különösen azért értékesek, mivel orálisan adagolva aktívak, bár parenterálisan is bevihetők. A találmány szemléltetésére, és nem korlátozására a következő példákat mutatjuk be. 1. példa Streptomyces fradiae NRRL B—3360 ferde agar tenyészetéhez hozzáadtunk 10 ml lefölözött steril tejet. A lefölözött tejes szuszpenziót 0,1—0,2 ml-es mennyiségben steril kémcsövekben liofilizáltuk és a fagyasztva szárított tenyészetet használtuk egy 250 ml-es terelőlapos Erlenmeyerlombik beoltására, amely 40 ml alábbi összetételű inokulum-táptalajt tartalmazott: A) Inokulum-táptalaj őrölt zabliszt élesztőhidrolizátum MgS04 . 7H 2 0 Mennyiség 10 gramm 10 gramm 50 gramm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 foszfátpuff er* desztillált H20 pH = 6,6 2 ml 1000 ml * foszfátpuff er: KH2 P0 4 Na2 HP0 4 91 gramm 95 gramm desztillált H2 0 1000 ml Az inokulumlombikot 1 napon át 28 °C-on inkubáltuk egy 5 cm excentricitású körrázógépen (fordulatszám: 220/perc). 8 db 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk el, amelyek mindegyike 50 ml alábbi összetételű táptalajt tartalmazott: Mennyiség 30,0 gramm 25,0 gramm 10,0 gramm 0,5 gramm 1000 ml B) Komplex termelő táptalaj őrölt zabliszt szójababliszt desztillációs maradék nátriumaszkorbát desztillált H2 0 pH = 6,5 Ezután vizes nátriumcitrát-oldatot adagoltunk a lombikokhoz oly módon, hogy az alábbi táblázatban feltüntetett nátriumcitrát-végkoncentrációkat érjük el. Ezeket a lombikokat azután sterileztük, lehűtöttük, és beoltottuk 1,0 ml-rel a fent leírt módon előállított inokulumból. Az inokulált lombikokat 23 °C-on inkubáltuk egy 220 ford./perc sebességű, 5 cm excentricitású körrázógépen. 1 lombikot 3 nap múlva távolítottunk el, egy másik lombikot pedig 4 napi inkubálás után. Az egyes lombikok tartalmát 10 percen át 8500 ford./perc sebességgel centrifugáltuk és a felülúszót dekantáltuk a szilárd anyagról. A felülúszót Proteus vulgaris MB—838 tesztorganizmus alkalmazásával határoztuk meg. A 3, illetve 4 napi inkubálás után kapott fermentlevek vizsgálatának eredményeit az alábbiakban mutatjuk be: Táptalaj komplex termelő komplex termelő komplex termelő komplex termelő össznövekedés 2. példa A (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav előállítását az 1. példában megadott módon végeztük. Az alábbi kísérleti eredményeket kaptuk. g/nátriumegység/ml citrát. H2 0 antibiotikum 3 nap 4 nap 0 2,3 2,4 1,0 2,6 2,2 2,0 2,7 2,4 4,0 3,7 2,9 58% 21% Táptalaj komplex termelő komplex termelő komplex termelő komplex termelő komplex termelő össznövekedés g/l nátriumcitrát. H2 0 0 1,0 2,0 4,0 8,0 egység/ml antibiotikum 3 nap 2,1 2,7 3,0 3,6 4,1 95% 4 nap 2,5 2,3 2,9 3,6 4,1 64%
