161694. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) cisz-1,2-epoxipropilfoszfonsav előállítására
161694 13 14 glukóz-1 -foszfát 2,1 KCl 1,0 9,0 +3 19,9 glukóz-1-foszfát 4,2 KCl 1,0 9,0 + 3 21,8 glukóz-6-foszfát 1,7 KCl 1,0 9,0 +3 18,5 glukóz-6-foszfát 3,4 KCl 1,0 9,1 +3 23,5 dinátriuminozinát 2,35 KCl 1,0 9,2 +3 14,4 dinátriuminozinát 4,7 KCl 1,0 9,2 +3 21,2 * A foszforforrásokat 1,0 és 2,0 g/l K2HPO4 foszfortartalmával ekvivalens koncentrációkban adagoltuk. 6. példa Streptomyces fradiae NRRL B—3360 ferde agar tenyészetéhez 10 ml steril lefölözött tejet adtunk. A lefölözött tej szuszpenziót steril kémcsövekben liofilizáltuk, amelyek 0,1—0,2 ml szuszpenziót tartalmaztak, és a fagyasztva szárított tenyészetet használtuk fel egy 250 ml-es terelőlapos Erlenmeyer-lombik beoltására, amely 40 ml alábbi összetételű inokulum-táptalajt tartalmaz : A) Inokulum-táptalaj Mennyiség kukoricakeményítő 10 g élesztőhidrolizátum 10 g MgS04 . 7H 2 0 50 mg foszfátpuffer* 2 ml deszt. H2 0 1000 ml pH = 6,6 40 ml egy 250 ml-es terelőlapos lombikban * foszfátpuffer: KH2PO4 Na2 HP0 4 deszt. H2 0 91 g 95 g 1000 ml Az inokulumlombikot egy napon át 28 °C-on inkubáltuk egy 5 cm löketű, 220/perc fordulatszámú körrázógépen. 4 db 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot készítettünk elő, amelyek 30—30 ml alábbi összetételű táptalajt tartalmaztak: B) Termelő táptalaj Mennyiség zabliszt 20,0 g szójaliszt 15,0 g nátriumcitrát 4,0 g C0CI2.6H2O 0,1 g deszt. H2 0 1000 ml Polyglycol 2000 0,5% (közvetlenül a lombikba adagolva) pH 6,5-re állítva Ezután vizes K2 HP0 4 -oldatot adagolunk a lombikokhoz oly módon, hogy a következő táblázatban feltüntetett K2 HPCvvégkoncentrációt érjük el. Ezeket a lombikokat sterileztük, lehűtöttük és 1,0 ml fent leírt módon elkészített inokulummal oltottuk be. A beoltott lombikokat 28 °C-on 5 cm löketű, 220/perc fordulatszámmal működő körrázógépen inkubáltuk; egy lombikot három-, egy másikat négynapi inkubálás után vettünk le. Az egyes lombikok tartalmát 8500 ford./perc sebességgel 10 percen át centrifugáltuk, és a felülúszót dekantáltuk. A felülúszót tesztorganizmus-10 15 20 25 40 45 50 55 60 65 ként Proteus vulgaris MB—838 alkalmazásával határoztuk meg. A három-, illetve négynapi inkubálás után kapott fermentlé meghatározási eredményeit az alábbi táblázatban mutatjuk be: C) Táptalaj alap termelő alap termelő %-os növekedés K4HPO4 gA 0 2,0 Szabad sav •«g/ml 3 nap 4 nap 29,7 29,3 33,6 37,5 30% 28% 7. példa A (-) cisz-l,2-epoxipropilíoszfonsav-termelést a 6. példában leírt módon hajtottuk végre. A következő vizsgálati eredményeket kaptuk: 30 Táptalaj alap termelő alap termelő %-os növekedés 35 K2 HP0 4 g/l 0 2,0 Szabad sav ^g/ml 3 nap 21,7 34,7 62% 4 nap 24,8 31,4 21% Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsav előállítására, amelynek során egy (-) cisz-1,2--epoxipropilfoszfonsav-termelő mikroorganizmust vizes táptalajban tenyésztünk aerob körülmények között, azzal jellemezve, hogy a táptalajhoz valamely foszforvegyület formájában a közeg 1 literére számítva 0,04—1,0 g foszfort adagolunk és a kapott fermentléből kinyerjük a (-) cisz-l,2-epoxipropilfoszfonsavat. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként valamely Streptomycest alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,10—1,0 g/l táptalaj foszforkoncentrációt hozunk létre. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy foszforvegyületként 0,50—5,0 g/l táptalaj mennyiségű dikáliumhidrogénfoszfátot adagolunk. , 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy Streptomyces-ként egy Streptomyces fradiae^törzset, pl. az NRRL B—3357, NRRL B—3358, NRRL B—3359 vagy NRRL B—3360 jelűt alkalmazzuk.
