161670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás markolidantibiotikum előállítására streptomycestörzs segítségével
161679 5 % foszforwolframsavval végzett kifejlesztéssel z A 6599 antibiotikum és kitasamicin különöző mennyiségű, öt azonos komponensre válik zét, míg az A 6599 még egy, és a kitasamicin lég négy kiegészítő komponenst is ad, melyek ,em azonosak. Kromatográfiai vizsgálatok alapján a találíány szerint előállított antibiotikum olyan omplex, mint amilyen a leukomicin. Az egyes omponensek minőségi különbözősége mellett z azonos komponensek még mennyiségi különözőséget is mutatnak. Az A 6599 antibiotikum agardiffúziós-, ill. kailláris-teszttel a következő hatásspektrumot íutatja: észt-organizmus Legkisebb gátlási "izsgálati módszer koncentráció A 6599 bázis mcg/ml .gardiffúziós-teszt acillus subtilis ATCC 6633 8 licrococcus pyogenes var. aureus SG 511 8 arcina lutea SG 125 4 acillus globifer OH 11 4 acillus globifer EH 11 (eritromicin rezisztens) 16 acillus mycoides SG 756 8 acillus mycoides SG 756 TF (oxitetraciklin rezisztens) 4 [ycobacterium phlei SG 346 16 [ycobacterium smegmatis SG 987 64 '.apilláris hígítást teszt [ycoplasma gallisepticum p,l (bakteriosztatikus) [icoplasma hyorhinis 3,8 (bakteriosztatikus) oxicitási teszt z LD5o-t fehér atároztuk meg. egereken ABAFi-hibrid törzzsel dagolás módja LD50 A 6599 antibiotikum-tartarát mg/kg egérsúly ijekció: intraperitoneális 1050 találmányt a következő példák magyarázzák, 2 nem korlátozzák: 1. példa Oltókultúraként a hordozóanyag, mint steril ild, vagy sovány tej liofilszárításával előállított \ 6599 törzs spórakonzervét használjuk a köítkező összetételű agartáptalajon: 6 I. zabliszt 2,0% II. szacharóz 0,3% agar-agar 2,0% dextrin 1,5% deszt. víz karbamid 0,01% pH = 7,0 NaCl 0,05% "~ KH2 P0 4 0,05% élesztőextrakt 0,1% bakt. pepton 0,5% FeS04 • 7;H 2 0 0,001% agar-agar 3,0% deszt. víz pH 6,8 — 7,0 Előtenyészethez, az oltóanyag süllyesztett kultúrában való elszaporítására a következő tápanyag-összetétel mutatkozott előnyösnek: glükóz 1,5% kukoricalekvár (szárazanyag) 1,0% élesztőextrakt vagy száraz élesztő 0,5% CaCOg 0,3% sterilizált csapvíz pH 6,8 — 7,0 500 ml-es hengeres tenyészedénybe 50 ml előbbi tápoldatot öntünk, 35 percig 120 °C-on sterilizáljuk, lehűlés után 5 térf.%, 48 óra hosz^ szat tenyésztett előkultúrával beoltjuk, majd az edényt 29—30 °C hőmérsékleten rázzuk. Az antibiotikum képződését 72, 96 és 120 órai tenyésztés után mikrobiológiai módszerrel meghatározzuk. A tesztelést agardiffúziós lemezen Bacillus subtilis ATCC 6633 baktériummal végezzük. Az A 6599 antibiotikum képződésének maximumát a 3 és 5 fermentációs nap közötti időben éri el. 2. példa A nagyobb méretű tenyésztést fermentorban végezzük. Az oltóanyag elszaporítására az 1. példában megadott tápanyagot használjuk. A 2 l-es állólombikba töltött 400 ml azonos táptalajú 2. 61670 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 50 ml tápanyagot egy 500 ml-es hengeres tenyészedénybe öntünk, 35 percig 120 °C-on steri-30 lizáljuk, majd lehűlés után a ferdeagar-tenyészet spóraszuszpenziójával beoltjuk. Az edényt ezután 2 napon át 29—30 °C hőmérsékleten rázzuk és mint süllyesztett kultúrát (5 térf.% mennyiségben) a következő összetételű fermen-35 tációs táptalaj beoltására használjuk: cukorrépamelasz 0,5% glükóz 0,5% burgonyakeményítő 4,0% szójababliszt 2,0% élesztőextrakt 0,1% CaCOg 0,2% napraforgóolaj 0,1% sterilizált csapvíz pH 6,8 — 7,0
