161606. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsav-származékok előállítására
7 161606 8 "konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk és 75 g szilikagélt tartalmazó oszlopon szűrjük. Az egyesített szűrletek 11 g szárazanyagot adnak. Ezt 520 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kloroformmal és kloroforrn-accton eleggyel kromatografáljuk. A kloroform-aceton (9:1)duátumok 7,6 g amorf 3-(dezacetoximetü>34>enzoil-tiometil-7-(tiazolinü-(2)-merkaptoacetilamino)- cefalosporánsavat tartalmaznak, amely nátrium-o-etilhexanoáttal a (VI) képletű nátriumsóvá alakul át. Rfsi - 0.50; az UV-spektrumon vízben \ = 240 nm-nél (e= -19.200) és \ = 274 nm-nél (r - 20 000) maximum van. A kiindulási anyagként használt 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltio metil-7-brómacetilamino-eefalosporánsav következó'képpen állítható eló': 17,5 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoütiometil-7-aminocefalosporánsav (lásd a 650 444 számú belga szabadalmi leírást) és 12,5 ml trietilamin 1 liter dimetilformamidos oldatát 1 óra alatt jól kevert, -13 és-15* között tartott 9,2 ml brómacetilbromid 100 ml ' metilénkloridos oldatához csepegtetjük (nitrogénatmoszférában). A hőmérsékletet 1,5 óra alatt lassan 10*-ra hagyjuk emelkedni és itt tartjuk egy további félóráig. Ezután az oldószer nagy részét 0,5 - 1 Hgmm-es vákuumban. szárazjég-aootonOs hűtőt alkalmazva ledesztilláljuk. Az olajos terméket 6 pH-jú foszfátpufferbe öntjük, és 1 liter ecetészterrel kirázzuk. Mindkét fázis határán csapadék képződik, amelyet szűréssel és centrifugálással elválasztunk. Ezután a vizes fázis pH-ját 2-re állítjuk be. konyhasóval telítjük és a szerves fázist elválasztjuk. A vizes fázist 600 és 400 ml ecetészterrel utánaextraháljuk. Telíteii konyhasóoldatos mosás után a szerves fázisokai nátriumszulfáttal szárítjuk és egymás után egy 100 g szilikagélt tartalmazó oszlopon szűrjük. A szűrleteket vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 30 ml etanollul felvesszük és -20*-on kikristályosítiiik Igy 7.8 g 3-(dezan * o x ime t il)- 3 -be nzoiltiometil- 7-brómacetilamino-cefalos poránsavat kapunk 137-138*-os olvadásponttal. IU52 0,55. A nátriumsó UV-spektruma a következő értékek« ! mutatja; X max 243 nm (r - 16 800) és 275 nm (e = 20.600) la|f)° = -47* t 1* ( c = 1; 0,1-M nátriumbikarbonát-aceton (1:1) elegyben). 7. példa 4,73 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil-7-/tiazo-1 i nil - (2)- merk aptoace til amino/ -cefalosporánsavat (nátriumsó) 35 ml piridinben oldunk és azonnal hozzáadunk 35 ml dioxánt. Ehhez 20,9 ml 4o %-os higanyperklorátot adunk és 45*-on erősen keverve 45 percig reagáltatjuk (nitrogénatmoszférában). Lehűtjük, 11,1 ml tiobenzoesavat adunk hozzá és 5 percig rázzuk. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, és a maradék 140 ml vizes oldatát „Celite"-en leszűrjük. A szürletet egymás után 90 ml toulollal, kétszer 55 ml „Amberlite" LA-2 és 115 ml toulol elegyével és kétszer 90 90 ml toulollal mossuk. Végül a vizes fázist oszlopon szűrjük, amelyik alulról felfelé 8,5 ml „Sephadex" CM C-25-ot (H*-ciklusban), 34 ml „Alox" ot. 8.5 ml „Zeo-Karb" 226-ot (FT-ciklusban), 34 ml „Alox"-ot, 8,5 ml „Dowex l"-et (acetát alakban) és 8,5 ml „Sephadex"' CM C-25-öt (H*-ciklusban) tartalmaz. A „Celit"-et, a szerves fázisokat és az oszlopot kétszer 30-30 ml vizzel utánaextraháljuk, az oszlopot ezenkívül további 200 ml vizzel eluáljuk. Az egyesített eluátumokat vákuumban bepároljuk, a kis mennyiségű csapadékot szűréssel eltávolítjuk, és szárazra pároljuk. A maradékot 10 ml alkohollal digeráljuk, és így tiszta 3-(dezacetoximetil)-3 -piridinometil - 7-/tiazolinil (2)- merkaptoacetilamino) - cefalosporánsav keletkezik |a| ^°= • 41 * ± 1 * (c = 1, vízben) UV - spektrum vízben . 8max257 mn (e = 13.000). Rfioi A = 0,18. <* példa 2,95 g 7 -/ tiazolinil -(2) merkaptoacetilamino/ -cefalosporánsav nátriumsót Oásd 3. példa) 150 ml 6 vízben oldunk. Az oldatot 37*-ra melegítjük és 0,7 ml 0.1-N nátronluggal pH= 7,5 re állítjuk be. Ezután 60 ml i.etilészteráz 2 ml vizes szuszpenzióját adjuk hozzá (az enzim Bacillus subtüis ATCC 6633-ból származik, lásd 1 080 904 számú angol szabadalmi leírást) és a keletkező ecetsavat ' 0,1-N nátronlúggal automata bürettából semlegesítjük (a beállítás pH = 7,3-ra történik)" 4 óra múlva a reakciót befejezzük. A pH-t 6,5-re állítjuk be, az oldatot G4-es ^zűró'n szűrjük és liofilizáljuk. 3.18 g sárgás olaj keletkezik, a 7-(tiazoIinil)-(2)- merkapto-acetilamino)-0- dezacetil- cefalos-16 poránsav nátriumsója. I , Ezt a nyersterméket közvetlenül 30 ml abszolút dimetiltormamid-8,4 ml trietilamin elegyben oldjuk, 5,05 ml c klóretilizocianátot adunk hozzá és fél órán át 20 szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert magas vákuumban eltávolítjuk, a gyantás, barna maradékot háromszor 150-150 ml abszolút éterrel eldörzsöljük. Az éterben oldhatatlan maradékot 75 ml 10 %-os pH = 6,7 foszfátpufferben felvesszük és 500 ml ecetészterrel kirázzuk. 26 3o ml 2- N sósavat hozzáadva, a vizes fázis pH-ját 2,5 te állítjuk be. Erős összerázás után a fázisokat szétválasztjuk e^ a . vizes fázist ezután többször 300 és 2oo ml eeetészterivl utánaextraháljuk. A szerves fázist kétszer 50-50 ml telitolt konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk és jO vákuumban szárazra pároljuk. A kapott gyantát kevés acetom hozzáadva kikristályosítjuk. A kristályokat leszivatjuk és aceton-éter (1 : 1) eleggyel mossuk. A nyers kristályos termék tovább tisztítható, ha a termék 18 ml metanolos szuszpenziójához 1,2 ml 3-M metanolos nátrium -a -etil-35 hexanoát oldatot adunk, az elegyet kevés „Hyflo"-val ( üatomaföld) tisztítjuk, vákuumban kb. 8 ml re pároljuk Ines 15°-on a tiszta 0-dezacetil-0-( /3-klóretilkarhamoil) 7 (tiazolinil- (2)- merkaptoacetamido) eetalosporánsa'. natriumsója kikristálvosndik. l'V spektrumban 255 nm-nel 40 mutat \,„ax -ot t = 10 850.(vízben). Az optikai forgatóké pesség: [a\ p 20 .99 ° i 1°. Vckonyréteg-kromatogramon a következő értékeket mutatja: 52. sz. rendszerre - 0,35. 101 A rendszerre =0,55, 4 j és ecetészter-piridin- jégecet-víz (62 : 21 :6 :11) rendszerben Rf=0,34. ' 50 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű 7-aminocefalosporánsav-származékok és ezek adott esetben belső sóinak előállítására, mely képletben R, legalább két heteroatomoi 55 tartalmazó 5 tagú heterociklilgyök. mely heteroatomkét < nitrogén-, oxigén- vagy Tíénatomokat tartalmaz, és 5 helyzetben szubsztituálatlai. vagy merkaptocsoporttai szubsztituált, és a további helyzetekben szubsztituálatlan vagy rövidszénláncu alkilgyökkel szubsztituált, továbbá 2- vagy 60 3-helyzetben közvetlenül két heteroatom között levő szénatomjával kapcsolódik a merkaptoacetilcsoport kénatomjához, továbbá mely képletben R2 szabad vagy karbonsavval vagy tiokarbonsawal észterezett hidroxilgyök, N-szubsztituált karbamoiloxigyök, melyben az oxigénatom helyett 65 kénatom is állhat, vagy fkvaterner) aminocsoport - azzal jellemezve, hogy a) V képletű vegyületet, mely hon Z halogénacetilgyök és R, a fent megadott jelentésű. R, -SH képletű merkapto 70 vegyülettel reagáltatunk, ahol R, a tent megadott jelentésű, vagy b) V képletű vegyületet, melyben Z hidrogén, R,-S-CH2-CO-csoporttal acilezzük és ha szükséges, a keletkezett szabad karbonsavval észterezett hidroxilcsoportot 76 tartalmazó vegyületeket egymásba átalakítjuk, és ha 4
