161592. lajstromszámú szabadalom • Stabilizált enzimtartalmú vizsgálati reagensek
161592 Az enzimatikus reakcióknál használt szubsztrátumok közül pL az alábbiakat említjük: aminosavak, mint alanin, ketosavak, mint a- ketoglutarát, cikrok, mint glükóz, cukorfoszfátok, mint fruktóz- 1,6- difoszfát, foszforsavészterek, mint a foszfor-enol- piruvát és kreatinfoszfat, SH- tartalmú . vegyületek, mint a glutation és hasonlók. A pufferanyagokrá pl. az alábbiakat soroljuk fel: foszforsavak vagy foszforsav-keverékek különböző' alkálifémsói, az ecetsav bórsav, ftálsav, erős lúgokkal képzett sói, szerves vegyületek, mint a trisz-hidroximetil-aminometán stb., 10 amelyek normál körülmények mellett biokémiai reakcióknál felhasználhatók. A töltőanyagokon a találmány szempontjából olyan nem-ionos, szerves vegyületeket értünk, amelyek a liofilizálási műveletet megkönnyítik. Ilyen anyagok pl. a zselatin, albuminok és hasonló anyagok. A segédanyagok IS közül végül a lefolytatni kívánt biokémiai reakcióknál mindenkor szükséges, vagy kívánt anyagokat használjuk, ilyenek pl. bizonyos ionok sói, aktiválószerek (pl. a hexokinázhoz redukált glutation) stb. A készítmények megfelelő összetétele a szakemberek 20 számára általában ismeretes. Egyszerű előkísérletekben különösebb nehézség nélkül határozhatjuk meg a polivinilpirrohdonnak azt a mennyiségét, amely a lefolytatni kívánt vizsgálati reakciót nem zavarja vagy befolyásolja. A találmány szerinti vizsgálati reagens-kombinációk elő- 25 állítását a következőképpen hajtjuk végre: )1. A kívánt reakció lefolytatásához szükséges összes anyagokból (segédenzimek, koenzimek, szubsztrátumok, pufferanyagok, segédanyagok és adott esetben töltőanyagok) polivinilpirrolidonnal a reakció lefolyása szempontjából 30 optimális arányokban vízzel oldatot készítünk, amelynek térfogatát és pH-értékét a kívánt módon rögzítjük; 2. a kapott oldatot mindenkor a kívánt egységnyi menmiségnek megfelelően alkalmas tartályokba elosztjuk; 3. a tartályok tartalmát liofilizáljuk és ezt követően a •* tartályokat azonnal lezárjuk. A találmány szerinti vizsgálati reagens-kombinációk vízben könnyen oldódó porózus porok, amelyek zárt tartályban évekig eltarthatok. A találmány szerinti készítmények enzimatikus vizsgálatokhoz való, kész reagensek előállítása terén 40 jelentős műszaki haladást képviselnek. A használatbavételkor nincs egyéb teendő, mint a megfelelő tartály tartalmát meghatározott mennyiségű vízben feloldani, ehhez a vizsgálandó anyagot (pl. szérum) hozzáadni és a készítményhez fűzött előírás szerint a mérést elvégezni (pl. az extinkció *" mérése fotométerben). A találmány szerint az alkalmazott stabilizátor oxidációval szemben teljesen ellenállóképes, igen jó stabilizáló hatást fejt ki, olcsó és a felhasznált enzimek aktivitását nem befolyásolja. A következő példák a találmányt közelebbről ismertetik, részletezve a vizsgálati készítmények összetételét, valamint alk am ázásukat; 50 /. példa Készítmény a glutamát-piruvát-transzamináz (GPT) met határozására 60 2,43 g 0,21 g 2,05 g 0,35 g 1,0 g 0,30 g 0,05 g 0,0015 g Na2 HP0 4 -H 2 0 NaH2 P<VH 2 0 65 DL-alanin a-ketoglu tarát polivinilpirrolidon szérum albumin NADH 70 laktát-dehidrogenáz A fenti keveréket 90 ml kétszer desztillált vízben feloldjuk és a vizes oldatot híg nátriumhidroxiddal 7,6 pH-étékre beállítjuk. Ezután az oldatot kétszer desztillált vízzel 100 ml-re feltöltjük, végül fagyasztjuk és fagyasztással szárítjuk. 76 2. példa Készítmény a glukóz meghatározására 0,050 g trietanolamin-hidroklorid 0,025 g nátriumkarbonát 0,050 g NAIX 0.050 g andenozin-5'-trifoszfát 1,0 g , polivinilpirrolidon 0,005 g hexokináz 0,005 g glűkóz-6-foszfát-dehidrogenáz 0,300 g szérumalbumin A készítmény előállítását az 1. példa szerint végezzük. 3. példa Készítmény aldoláz meghatározására 2,43 g 0,21 g 0,14 g 0,005 g 1,0 g 0,30 g 0,05 g Na2 HPO„-H 2 0 NaH2 P0 4 -2H 2 0 fruktóz-1,6-difoszfát iódaeetáw polivinilpirrolidon szérumalbumin NADH 0,0015 g glicerinfoszfát-dehidrogenáz 0,0015 g trifoszfát-izomeráz A készítmény előállítása az 1. példa szerint történik. 4. példa Készítmény a piruvát-kináz meghatározására 2,100 g trietanolamin-hidroklorid 0,700 g káliumklorid 0,300 g magnéziumszulfát 0,040 g etiléndiamin-tetraacetát 0,250 g nátriumkarbonát 0,050 g NADH 0,190 g adenozin-5-difoszfát 0,001 g laktát-dehidrogenáz 0,300 g szérumalbumin 1,000 g polivinilpirrolidon 0,100 g foszfo-enol-piruvát A készítmény előállítása az 1. példa szerinti módon történik. 5. példa Készítmény a kreatinkináz meghatározására 2,100 g trietanolamin-hidroklorid 0,250 g nátriumkarbonát 0,100g adenozin-5'-difoszfát 1,000 g adenozin-5'-monofoszfát 0,250 g magnéziumacetát 0,100g NADP 0,100g glukóz 15,00 g kreatinfoszfat 0,800 g glutation, (redukált forma) 0,500 g hexokináz 0,500 g glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz 0,300 g szérumalbumin < 1,000 g polivinilpirrolidon A készítmény előállítását az 1. példa szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy 7,0 pH-értéket állítunk be. 6. példa Készítmény aglutation-reduktáz meghatározására 2,43 g Na,HP04 -H 2 0 0,21 g NaH2 PO„-H 2 0 l,00g polivinüpÜTolidon 0,300 g szérumalbumin 2
