161567. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimek és enzim-inhibitorok dúsítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. VII. 14. (BA-2248) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság, 1968. VI. 15. P 17 68 934.8 Közzététel napja: 1972. IV. 28. Megjelent: 1974. IV. 23. 161567 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02 jJjy&K lAULMiil í/^> Kőnyvfár ^ l\UII|HSI * / u / a j d o IÍ a Feltaláló(k)Prof. Dr. Werle Eugen vegyész és orvos, Dr. Fritz Hans vegyész, München, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Farbenfabriken Bayer Aktiengesellschaft, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás enzimek és enzim-inhibitorok dúsítására 1 A találmány tárgya eljárás enzimek és enzim-inhibitorok dúsítására oly módon, hogy az enzim inhibitorát, illetve az enzimet vízben oldhatatlan vagy oldható hordozón kovalensen megkötjük, a kapott adduktot vizes közegben enzim, illetve enzim- inhibitor oldatával hozzuk érintkezésbe és a 5 kapott komplexet ismert módon mossuk, disszociáltatjuk és a végterméket izoláljuk. A találmány lényege, hogy az adduktot a komplexképzés eló'tt alifás poliamin-vegyülettel reagáltatjuk, amelynek csak egy amino-csoportja szabad, valamennyi többi amino-csoportja acilezéssel szemben védett. írj A 15 17 753 sz. NSZK közrebocsájtási irat tárgya: eljárás polipeptidek dúsítására azzal jellemezve. !..>g\ valamely polipeptidet kovalens kötéssel valamely vízben oldhatatlan vagy oldható hordozóhoz kapcsolunk, az így kapott adduktot vízben felvesszük, olyan oldattal hozzuk érintkezésbe, amely ^5 komplex-kepzo anyagokat tartalmaz, az így kapott polipeptid-komplexképző' anyagból álló komplexet kimosással vagy kromatográfiásan tisztítjuk, disszociáltatjuk és izoláljuk a komplexképző anyagot. A fenti említett NSZK közrebocsájtási irat egyik speciális 20 tárgya: az eljárás alkalmazása enzim-inhibitorok dúsítására oly módon, hogy egy olyan enzimet, amelynek hatását a megfelelő enzim-inhibitor gátolja, kovalensen egy hordozón kötünk meg, az. így kapott oldhatatlan vegyületet vízben az enzim-inhibitor oldatával hozzuk érintkezésbe, az így kapott 25 komplexet mosással tisztítjuk, disszociáltatjuk és izoláljuk az enzim-inhibitort. A fent említett NSZK közrebocsájtási iratban leírt eljárás szerint alkalmazandó vízben oldhatatlan és oldható hordozókként mindenekelőtt polimer anyagok jönnek számításba. 30 Ezek olyan funkciós csoportokat kell hogy tartalmazzanak, amelyek képesek arra. hogy az említett polipeptidekkel, enzimekkel és enzim-inhibitorokkal peptidkémiai módszerek alkalmazása eseten reagáljanak, tzek között elsősorban olyan gyantákat kell említenünk, amelyek anhidrid-, savklorid-, 35 'izocianát- és az azid-csoportokat tartalmaznak, valamint olyan gyantákat (Makromolekular-Cheime 39, 13 /1960), amelyekben aktívált fluoratomok vannak jelen. Ismeretes, hogy enzimeket vagy fehérje-szerű vegyületeket meg lehet kötni polimer anyagokon. így pl. tripszint Katchala í. ....Pl ,*,;.., 'Riocbem. 3 1905/1964) már megkötöttek etilén-maléinsavanhidrid kopolimeren. A keletkező adduktokban az enzimek többé-kevésbé megtartják aktivitásukat. Ismeretes az itt említett cikkből továbbá az is, hogy a polimerhez kötött enzim aktivitása inhibitorok segítségével gátolható. Aktivalt csoportoknak a molekulába vitele esetén szóbajöhetnek a közismert, kereskedelmi forgalomban hozzáférhető karboxil-tartalmú ioncserélő gyanták is. Ezeket a gyantákat a következőkben A-gyantának nevezzük. Ha ezekbe a gyantákba házisos csoportokat viszünk be, úgynevezett poliamfoter-gyantákat kapunk, amelyekben a gyanta egyoldalúan negatív töltése gyengül, illetve közelítőleg semlegesító'dik: ezeket a következőkben N-gyantának nevezzük. Azt találtuk, hogy az említett NSZK közrebocsájtási irat szerinti eljárást jelentősen továbbfejleszthetjük, ha hordozóként N-gyantákat alkalmazunk. Ennek során a következő, lényeges haladást jelentő eredményeket érjük el. 1. A N -gyanták kötő-kapacitása általában magasabb, mint az A-gyantáké. 2. N-gyanták alkalmazása esetén az izolálandó anyagokat jóval enyhébb körülmények között például kevésbé savas pH-n-izolálhatjuk, mint A-gyanták alkalmazása esetén (lásd a 2. ábrát). 3. A N-gyantak olyan, alacsony izoelektromos pontú enzimeket és enzim-inhibitorokat is megkötnek, amelyeket az A-gyanták nem vagy csak nagyon kevéssé kötnek meg. így például az N-kallikreininhibitor-gyanták megkötik a kallikreint, amelyet az A-kallikreininhibitor-gyanták nem kötnek meg. az N-tripszingyanták pedig megkötik a szójababból, tyúk tojásfehérjéből és szérumból származó inhibitorokat, 161567