161558. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pepsztatin előállítására

161558 tános reakcióval a megfelelő észterré alakítható. Az 1. ábra a pepsztatin káliumbromid-pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektruma. A 2. ábra a pepsztatin-metilészter káliumbromid-pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektruma. A 3. ábra a diacetilpepsztatin-metilészter tetradeuterometanolban felvett mágneses magrezonancia-spektruma. A pepsztatint a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy szénforrást, tápanyagként felhasználható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó vizes oldatban, aerob körülmények között Streptomyces törzset tenyésztünk. A tenyésztést addig végezzük, amíg jelentős mennyiségű pepsztatin nem halmozódik fel az oldatban, majd a pepsztatint kivonjuk és elkülönítjük. A találmány szerint a pepsztatint észtereivé alakíthatjuk. Az enzimgátló hatású mikrobiológiai termékek rendszeres szűrővizsgálatát 1965 óta végezzük, és vizsgálataink során eddig a tirozin-/5--hidroxiláz-gátló akvaiamicint, a dopamin-/?-hidroxiláz-gátló és vérnyomáscsökkentő hatású fuzársavat, valamint a tripszin-, plazmin- és kallikrein-gátló hatású leupeptineket fedeztük fel. Kiindulási pontunk az volt, hogy a proteázokat, észterázokat és hasonló enzimeket termelő mikroorganizmusok saját enzimeik védelme érdekében kitermelik a megfelelő inhibitorokat is. Vizsgálataink során számos Streptomyces törzs tenyészetének szűrletében felfedeztük a pepsztatint. A pepsztatin tanulmányozása során kitűnt, hogy ez a vegyület a gyomorfekély megelőzésére és gyógyítására használható fel. Hangsúlyozni kívánjuk, hogy a pepsztatin az egyetlen olyan vegyület jelenleg, amely specifikus pepszingátló hatással rendelkezik, és semmilyen egyéb specifikus pepszingátló hatású anyagot eddig még nem ismertettek. A pepsztatint már számos Streptomyces faj tenyészetében felismertük, és véleményünkxszerint a pepsztatintermelő képesség általánosítható az egész Streptomyces családra A leírásban három olyan törzs jellemzőit ismertetjük, amelyek pepsztatint termelnek. A szögletes zárójelben megadott színjelzések a Color Harmony Manual of Container Corporation of America jelölései. A Streptomyces testaceus MC144—Cl törzs jellemzői: A törzset a német szövetségi köztársaságbeli Cux Haven-i erdőben 1968 augusztusában gyűjtött talajmintából különítettük el, és laboratóriumunkban az MC 144—Cl jelzéssel láttuk el. A törzset a Kogyo Gijutsuin Hakko Kenkujyo intézetben 1969. május 21-én, 312 szám alatt helyeztük letétbe. A törzset ezenkívül az American Type Culture Collection gyűjteményben ATCC 21469 szám alatt is letétbe helyeztük, és itt kutatók számára beszerezhető. A törzs mikroszkopikus képén a szubsztrát-micéliumok elágazóak, és enyhén hullámos léghifákat hordoznak. A léghifákon nyílt spirálokat, terminális spirálokat és kacsokat észleltünk, csigákat azonban nem. A spórák felülete sima. 5 A következőkben a törzs növekedési jellemzőit soroljuk fel különféle táptalajokon. 1. Glicerin—Czapek-táptalaj (a tenyésztés hő-10 mérséklete 27 °C): halványsárga — halványbarna, később sárgásbarna növekmény, gyengén . fejlődő, szürkésfehér — halványszürke légmicélium, hosszú tenyésztés után sárgás oldható pigment képződik. 15 2. Krainsky glükóz—aszparagin agar (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): halványsárga — sárga [Pastel Yellow, 1 1/2 fb] növekmény, szürkésfehér — világosszürke légmicélium, nem kép- . ződik oldható pigment. 20 3. Kalcium-malát agar (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): kevés, színtelen növekmény, vékony, szürkésfehér — halványszürke légmicélium, oldható pigment nem képződik, a növekmény körül nem jelenik meg átlátszó zóna. 25 4. 1,0% nátriumnitrátot tartalmazó pepton — víz (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): igen csekély, színtelen növekmény, légmicélium nincs, oldható pigment nincs, a nitrát-nitrit redukciós folyamat nem egyértelmű. 30 5. Burgonyaszeletek (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): bőséges, halványsárga, halványbarna vagy vörösesbarna [Rust Tan, 5 le-BrickRed, 6 ng] növekmény, kevés, fehér — szürkésfehér légmicélium, oldható pigment nem képződik. 35 6. Keményítőlemez (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): 21 nap elteltével sincs növekedés. 7. Pepton-húskivonat-agar (a tenyésztés hőmérséklete: 27°C): színtelen növekmény, nincs légmicélium, oldható pigment nem képződik. 40 8. Pepton-húskivonat-agar (a tenyésztés hőmérséklete 37 °C): 21 nap elteltével sincs növekedés. 9. Loeffler-féle koagulált szérum (a tenyésztés hőmérséklete 37 °C, ill. 30 °C): 21 nap eltel-45 tével sincs növekedés. 10. Húsleves-zselatin, szúrt tenyészet (20 °C): színtelen növekmény, légmicélium nincs, oldható pigment nem képződik, a zselatin a tenyésztés harmadik napján elfolyósodik (azaz erős zselatin-50 elfolyósító hatás lép fel). 11. Tej-táptalaj (a tenyésztés hőmérséklete 37 °C): színtelen növekmény, légmicélium nincs, a tej koagulálódik, majd peptonizálódik (mind a koagulálódás, mind a peptonizálódás erős). 55 12. Tirozin-agar (a tenyésztés hőmérséklete 27 °C): csekély, színtelen növekmény, légmicélium nincs, oldható pigment nem képződik, a tirozinázreakció negatív. 13. Cellulóz a (tenyésztés hőmérséklete 27 °C): 60 21 nap elteltével sincs növekedés. A törzs szénhidrát-felhasználását Pridham— Gottlieb-táptalaj on határoztuk meg, a tenyésztést 27 °C-on végeztük. A következő eredményt 65 kaptuk: a törzs a mannózt és szukrózt haszno-