161523. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-béta 3,4-dihidroxi-fenilalanin előállítására fermentálással

161523 8 nátriumklorid csapvízzel kiegészítve 200 g 33 literre. A táptalaj pH-ját 40 ml 10 n nátriumhidroxidoldattal beállítjuk 7-re, majd gőz átbuborékoltatásával 122 "C-ort 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata 38,5 liter. Ezt 600 g glukóz-monohidrátot tartalmazó 1,5 liter steril vizes oldat hozzáadásával kiegészítjük 40 literre. Ekkor a táptalaj pH-ja 6,9. Ezután beoltjuk a Vibriotyrosinaticus ATCC 19 3">8 törzs 200 ml rázott Erfenmeyer-tenyészetével. A tenyészetet keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 30 °C-on 10 óra hosszat mkubáljuk a termelStenyészet beoltására való felhasználása előtt. Á termelőtenyésztést 800 literes fermentorban végezzük. A fermentorba a következő anyagokat töltjük: kufcoricaleftvár (50%-os száraz kivonat) magnéziumszulfát T H^O csapvízzel kiegészítve 2,2 kg, 0,220 kg 390 literre. A pH-nak 120 ml 10 n nátriumhidroxid-oldattal 6,6-ra való beállítása után hozzáadunk 1,1 kg kalciumkarbonätot, majd a táptalajt gőz átbuboréltoltatásával 122 °C-on 40 percig, sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata 425 liter. Ezt kiegészítjük 440 literre 4,(4 kg glukőz-monohidrátot tartalmazó 10"liter vizes steril oldat és 0,880 kg ammóniumszulfatot tartalmazó &•'liter vizes steril oldat hozzáadásával. A pH ekkor 7. A táptalajt beoltjuk a 75 literes fermentorban a fent leírt módon készült § liter oltótenyészettel. A tenyésztést percenként 180 fordulatú turbinás keverővel valö keverés és óránként 20 m3 steril levegővel vald levegőztetés közben 30 "C-on 10 óra hosszat folytatjuk, miközben a tenyészet pH-ját 6 n ammónia-oldat vagy 4 n sósav hozzáadásával' automatikusan 6,6+0,05 értéken tartjuk. 7 óra hosszat folytatjuk a pH-t 5,5 értéken tartva. A fermentlé végső térfogata 430 liter. A titer literenként 3,55 g L-DOPA. 5 4. példa Vibrio tyrosinaticus ATCC 19 378 tenyészetet készítünk a 3. példában leírt körülmények között, 20 óra elmúltával a tenyészet alkalmas az 1^ átalakítás végrehajtására. A fermentlé térfogatát beállítjuk 400 literre, és a pH-t 6,6 értéken tartjuk. Ezután hozzáadunk 400 g aszkorbinsavat tartalmazó 2,2 l|iter 6^5 pH-jú vizes oldatot, és a 15 fermentlevet percenként 180 fordulatú turbinakeverővel keverve és óránként 20 m3

steril levegővel levegőztetve 2 óra hosszat 30°-on tartjuk. Ezután a fermentléhez hozzáadunk 400, g asz<TM korbinsavat tartalmazó 2,2 ljter 6,5 pH-jú vizes oldatot,, majd 1,720 kg tirozint két vizes oldat alakjában, amelyek közül az egyik 645%-os n-nátriumhidroxid-oldatban, a másik 6,15,%-os sósavban, rat. Ezután. 1 órai időközben hozzáadunk 200 g aszkorbinsavat tartaimazó 1,1 liter 6,5 pH-s, vizes oldatot és 400 g aszkorbinsavat tartalmazó 2,2 liter vizes oldatot. _^ A tenyésztést 7 óra hosszat folytatjuk, a pH-t W 6,6 értéken tartva. A fermentlé végső térfogata 430 liter,, literenként 2,79 g L-DOPA tartalommal. 35 40" Szabadalmi igénypontok 20 óra elmúttával1

a tenyészet alkalmas a kfváffl* átalakítás elvégzésére. A fermentíé térfogatát küegészítpi 400* Bterre, és a pfí*t 6 n sósavval Beállítják 5,5>re. Ezután hozzáadjuk 215< g aszfcorbihsavnak 1,1 liter 5J5Í pH^jsS vÉses' oldatát, és pereenkélrt 180 fcwdsűMá: tarbsraakeveüövel keverve és ofrewkent 2ff m£ sterä levegővel levegőztetve a fermentfevet 2 óua hossza* 30 "C-oa tartjuk. Ezután italét hozzáadunk a férmeratléhez 215 g aszkorbinsavat tartalmazó 1,1 liter 5,5 pH-jú vizes oldatot, majd B,íS9 kg* L-tirozint 2 vizes oldat alakjában, amelyek közül az egyik 6,15%-os n-róMuHShMroiridbsttv a másik GtffjP/n-os n-sósavban. Ezután 1 órai időközöftfteö; 3 fefeen hozzáadunk 215 g aszkorbinsavat tartalmazó 1,1 liter 5;5 pH-jú vizes oldatot. A tenyésztést még 1. Eljárás, L-^(3,4-dihidroxi-íeml>-«-aianin előállítására L-tirozin, mikrobiológiai hidroxilálásával azzal jellemezve, hogy Vibrio> tyuesinaticus ATCC 19 378 törzset asszimilálhatói szén*-és nitrogénforrást és szervetlen, sókat tartalmazó levegőztetett táptalajban tirozin jelenlétében 22 és 32 °C közötti hőmérsékleten tenyésztünk,, majd a képződött terméket extraháljuk és meg-45- tisztítjjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás feganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a a Vibrio, tyrosinaticus tenyésztését megosztva, egy tenyésztési fokozatban 6,0 és 7,8 pH között és egy 5Q átalakítási fokozatban 4,0, és 7,0- pH között végezzük. 3. Az 1. vagy %„ igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a. iscmentié pH-ját savas,, illetve lúgos tirezin-oldat 55 kellő arányban való hozzáadásával áüítjjuk be.. 4. Az. 1—Z. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezY.e„ hogy a tirozin átalakítása közben glukózt adunk a fermentléhez. 60 5. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módj,a azzal jellemezve* hogy a tirozin átalakítása közben, aszkorbinsavat adunk a fermentléhez. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. Győr-Sopron megyei Nyomda Vállalat Soproni üzeme, 73.11378