161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
19 4. lépés: H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-OMe. .(COOH) előállítása 30,38 g (50 mmól) védett tripeptidésztert (3. lépés) 4,5 g (50 mmól) vízmentes oxálsavval együtt feloldunk 300 ml metanolban és kb. 0,5 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és a metanol-oldat betöményítése után éterrel kristályosítjuk a tripeptidészter-oxalátot. 26,8 g (95%) anyagot kapunk. Op.: 143—144°, Rj 0,38—0,42. Analízisa: C24 H 41 0 12 N3 (M; 563,592) képlet alapján: Számított: C: 51,1%, H: 7,3%, N: 7,45%, O: 34,1%. Talált: C: 51,0%, H: 7,4%, N: 7,50%, O: 33,9%. 5. lépés: Z-Glu(OtBu)-Phe-OMe előállítása 35,5 g (60 mmól) védett glutaminsav diciklohexilammónium sóból az 1. lépésben leírt módon vegyes aíihidridet készítünk 6,66 ml (60 mmól) N-metil-morfolin és 7,92 ml (60 mmól) klórszénsav-izobutilészter segítségével. A vegyes anhidridet 12,9 g (60 mmól) fenilalanin-metilészter-klórhidrát és 8,82 ml (60 mmól) trietilamin 60 ml kloroformos oldatával reagáltatjuk. A reakcióelegyet az 1. lépésben leírt módon feldolgozva 26,1 g (87%) védett dipeptidésztert kapunk; az anyag petroléterrel kristályosítható. Op.: 85—86°, R® 0,95—0,98. [a]2 £— 8,75° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: CayH^Oy^ (M: 498,558) képlet alapján: Számított: C: 65,05%, H: 6,85%,, N: 5,6%, O: 22,45%. Talált: C: 65,00%, H: 6,90%, N: 5,6%, O: 22,40%. 6. lépés: H-Glu(OtBu)-Phe-ÖMe (COOH)2 előállítása 26,1 g (52 mmól) védett dipeptidésztert (5. lépés) a 2. lépésben leírt módon dekarbobenzoxilezünk 4,68 g (52 mmól) vízmentes oxálsav jelenlétében. A dipeptidészter-oxalátot éterrel kristályosítva 21,3 g (91%) anyagot kapunk. Op.: 126—129°, R* 0,15—0,25. Analízisa: C^tL^Oi,]^ (M: 454,466) képlet alapján: Számított: C: 55,5%, H: 6,65%, N: 6,15%, O: 31,7%. Talált: C: 55,6%, H: 6,75%, N: 6,30%, O: 31,5%. 7. lépés: Z-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-OMe előállítása 25,9 g (50,0 mmól) védett glutaminsav diciklohexilammónium sóból az 1. lépésben leírt mó-20 don vegyes anhidridet készítünk 5,22 ml (47 mmól) N-metil-morfolin és 6,2 ml (47 mmól) klórszénsav-izobutilészter segítségével. A vegyes anhidridet 21,2 g (47 mmól) dipeptidészter-oxa-5 lát (6. lépés) és 13,15 ml (94 mmól) trietilamin 100 ml kloroformos oldatával reagáltatjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, majd etilacetátban oldjuk (kb. 200 ml), 50—50 ml vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, 0,5 N kén-10 savval, vízzel mossuk és szárítjuk. Bepárlás után éter-petroléterből kristályosítjuk. 28,9 g (90%) védett tripeptidésztert kapunk. Op.: 130— 132°, R« 0,95—0,98. [a^° —9,39° (c=l, dimetilformamidban). 15 Analízisa: C^H^O^^ (M: 683,776) képlet alapján: Számított: C: 63,25%,, H: 7,20%, N: 6,15%), 20 O: 23,40%. Talált: C: 63,25%, H: 7,30%, N: 6,20%, O: 23,20%. 8. lépés: Z-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-N2 H ?> 25 előállítása 25,0 g (36,5 mmól) védett tripeptidésztert (7. lépés) feloldunk 75 ml metanolban és hozzáadunk 7,5 ml (108 mmól) 72%-os vizes hidrazin-30 hidrátot. Egy napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a csapadékos oldatot hűtjük, szűrjük és hideg metanollal mossuk a kristályokat. Szárítás után 20,0 g (80%,) védett tripeptidhidrazidot kapunk. Op.: 196—198°, Rj 0,82— 35 0,86. Analízisa: C33 H 49 0 9 N 5 (M:.683,782) képlet alapján: 40 Számított: C: 61,50%, H: 7,20%, N: 10,25%, O: 21,05%. Talált: C: 61,50%, H: 7,60%, N: 10,40%, O: 20,95%. 45 9. lépés: Z-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Glu-(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-OMe előállítása 20,5 g (30 mmól) védett tripeptidhidrazidot (8. lépés) feloldunk 90 ml dimetilformamidban, 50 majd —10°-ra hűtve 10 ml 6 N sósavat csepegtetünk hozzá úgy, hogy a hőmérséklet —10° körül maradjon (aceton-szárazjég hűtés!). Ezután 6,0 ml 5 M nátrium-nitrit-oldatot csepegtetünk be keverés közben, s az oldatot —5° körüli hő-55 mérsékleten tovább keverjük. Tíz perc után a reakcióelegyet —20°-ra hűtjük, 12,6 ml (90 mmól) trietilaminnal lúgosítjuk, majd 17,0 g (30 mmól) tripeptidészter-oxalát (4. lépés) és 4,2 ml (30 mmól) trietilamin 30 ml dimetilformamidos 60 oldatát csurgatjuk hozzá. A reakcióelegy kb. 30 perc keverés után géllé alakul. Éjszakán át állni hagyjuk, majd vízzel eldörzsöljük, a csapadékot szűrjük, vízzel kimossuk. A nyersterméket kb. egy liter etariolból kristályosítjuk. 23,5 g 65 (70%) védett hexapeptidésztert kapunk. Op.: 10
