161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
7 4. lépés: Z-Thr-Sel-Leue-NH 2 előállítása 124,5 g (287 mmól) karbobenzoxi-treonin diciklohexilammónium sóját és 3,15 ml (28,7 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 730 ml kloroformban, majd —10°-ra hűtve erős keverés közben 37,3 ml (287 mmól) klórszénsav-izobutilésztert adunk hozzá. Ezután nyolc percig —I0°-on keverjük, majd — 2Ö°~on hozzáadjuk 88 g (287 mmól) H-Ser-Leu-NH2 • (COOH)2 és 80,4 ml (574 mmól) trietilamin 570 ml dimetilformamidos oldatát. Fél óra alatt 0b -ig hagyjuk felmelegedni a reakcióelegyet, majd egy órán át ezen a hőmérsékleten keverjük, s végül éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy bepárlásával nyert maradékot 1 N kénsavval eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, 1 N kálium-bikarbönát oldattal, vízzel, majd éterrel mossuk, szárítjuk. 101.7 g (78%) anyagot kapunk. Op.: 218—220°, R* 0,59—0,69- [á\TM +5,05" (c—1, dimetilformamidban). Analízis a: C21 H 32 0 7 N4 ( M: 452,498) képlet alapján: Számított: C: 55,73%, H: 7,12%, O: 24,75%, N: 12,37%. Talált: C: 55,82%, H: 7,20%, O: 25,00%, N: 12,55%. 5. lépés: H-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 101,7 g (225 mmól) Z-Thr-Ser-Leu-NH2 -ot 2000 ml metanolban szuszpendálva 10 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció során az anyag feloldódik. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 68 g (95%) anyagot kapunk. Op.: 171—172°, Rj 0,28—0,36. Analízis a: C13 H 26 0 5 N 4 (M: 318,370) képlet alapján: Számított: C: 49,07%, H: 8,23%, O: 25,12%, N: 17,59%. Talált: C: 48,98%, H: 8,40%, O: 25,18%, N: 17,51%. 6. lépés: Z-Glu(OtBu)-Thr-Ser~Leu-NH2 előállítása 65 g (125 mmól) karboxibenzoxi-y-terc.-butilglutaminsav-diciklohexilammónium-sót és 1,375 ml (12,53 mmól) N-metil-morfolint feloldunk 125 ml kloroformban és —10°-on erős keverés mellett hozzáadunk 16,55 ml (125,3 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Nyolc percig keverjük, majd —20°-ra hűtve hozzáadunk 39,92 g (125,3 mmól) H-Thr-Ser-Leu-NH2 -ot 400 ml dimetilformamidban szuszpendálva. Fél óra alatt a hőmérsékletet hagyjuk 0°-ra emelkedni, majd egy órán át ezen a hőmérsékleten keverjük, s éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap a kivált diciklohexilammónium-kloridot kiszűrjük, az oldatot pedig bepároljuk. A maradékot éterrel eldör-8 zsörjük, szűrjük, éterrel, 1 N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel és végül éterrel mossuk. 76 g (96,5%) anyagot kapunk. Op.: 215—216°, R< 0,54—0,63. 5 Analízis a: C30 H 47 O 10 N 5 (M: 637,716) képlet alapján: Számított: C: 56,49%, H: 7,42%, N:10,98%. Talált: C: 56,44%, H: 7,90%, N: 10,99%. 10 7. lépés: H-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 74 g (116 mmól) Z-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-15 NH2 -ot 1200 ml metanolban szuszpendálunk és 7 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogenolízis végére az anyag feloldódik. A katalizátort kiszűrjük, a metanol-oldatot bepároljuk és a szilárd maradékot éterrel 20 eldörzsörjük, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 56,17 g (96%). Op. 167°-tól bomlik. R* 0,48—0,53. Analízis a: C22 H 41 O g N 5 (M: 503,588) képlet alap-25 ján: Számított: C: 52,46%, H: 8,2 %, N: 13,98%. Talált: C: 52,44%, H: 8,1%, N: 13,92%. 8. lépés: Z-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH.2 30 előállítása 80 g (159 mmól) H-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 -ot feloldunk 500 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 69,5 g (187,7 mmól) karbobenz-35 oxi-prolin-nitrofenilésztert. Az oldatot egy napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük. A szűrőn mossuk éterrel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, 1 N citromsav-40 oldattal, vízzel, s végül ismét éterrel, 114,3 g (98,2%) anyagot kapunk. A nyersterméket 900 ml metanol és 1700 ml diizopropiléter elegyébői„ átoldjuk. 102,5 g (87,8%) végterméket kapunk. Op.: 224—225°. R« 0,46—0,54. [a] 2 £~ 25,9° (c=l, 45 dimetilformamidban). Analízis a: Cg^^O^Ng (M: 734,830) képlet alapján: Számított: C: 57,20%, H: 7,40%, N: 11,43%. 50 Talált: C: 57,40%, H: 7,80%, N: 11,46%. 9. lépés: Z-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 5g 95,3 g (129,5 mmol) Z-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2-ot 1700 ml dimetilformamidban 10 g csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizálünk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, majd az oldatot kb. 800 ml-re betömé-60 nyitjuk (a szabad vegyület R j értéke 0,29—0,38), s hozzáadunk 72,05 g (138,05 mmól) karbobenzoxi-/?-terc,-bútü-ászparaginsav-pentaklórfenilésztert, valamint 19,35 ml (138,05 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet az aktív észter feloldá-65 sáig keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. 4
