161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
41 'Talált: C: 60,51%, H: 7,89%, O: 21,36<>/o, • . N: 10,50%. 4. lépés: BOC-Phe-Pro-Thr-Ile-Pro-NHNH2 előállítása 1,34 g (2 mmól) védett pentapeptidet (3. lépés) feloldunk 4 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 0,22 ml (2 mmól) N-metil-morfolint, majd —10°-on 0,26 ml (2 mmól) klórszénsavizobutilésztert. Tíz perc keverés után a vegyesanhidridhez adunk 0,5 ml (10 mmól) hidrazinhidrátot és 0°-on keverjük 1 óra hosszat, majd állni hagyjuk szobahőmérsékleten éjszakán át. Másnap az oldatot bepároljuk, a maradékot feloldjuk etilacetátban, mossuk 1 N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel és megszárítjuk, majd bepároljuk. A maradék szilárd habot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, diizopropiléterrel mossuk és szárítjuk. Az anyagot ezután feloldjuk 4 ml benzolban és 16 ml éterrel kicsapjuk. 1,0 g (72,6%) védett pentapeptidhidrazidot kapunk. Op.: 128—132°, R3 0,45—0,55. Analízisa: C/l3 H 53 0 8 N 7 (M: 688,817) képlet alapján: Számított: N: 14,23%. Talált: N: 14,20%. B) A szintézis'komponensek kapcsolása 12. példa: Z-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-(Gln-Lys(BOC)-Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro-Glu-Ther-Ser-Leu-NH2 előállítása 3,9 g (3 mmól) védett heptapeptidhidrazidot (2. példa) feloldunk 9 ml dimetilformamidban és —15°-ra hűtve előbb 1,0 ml (6 mmól) 6 N sósavat, majd 0,6 ml (3 mmól) 5 M nátrium-nitritet adunk hozzá. A reakcióelegyet 10 perc keverés után 0,84 ml (6 mmól) trietilaminnal semlegesítjük és hűtés, keverés közben hozzáadunk 3,9 g (3 mmól) undekapeptidamidot (1. példa) 0,84 ml (6 mmól) trietilamint tartalmazó 7 ml dimetilformamid és 1 ml víz elegyében oldva. Fél órán át —10°-on és fél órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, majd 2 napon át állni hagyjuk. Ezt követően az oldatot bepároljuk, etilacetáttal eldörzsöljük, a csapadékról az oldószert dekantáljuk, s az etilacetátos eldörzsölést előbb hideg, majd meleg etilacetáttal megismételjük, szűrjük, etilacetáttal mossuk. A kapott anyagot 10 ml metanolban feloldjuk és 0°-on 70 ml 1 N citromsav-oldattal kicsapjuk, szűrjük és vízzel mossuk. Szárítás után 14 ml acetonban feloldjuk és 110 ml etilacetáttal kicsapjuk. Az így nyert anyag szűrés, etilacetátos mosás és szárítás után 5,5 g (72%). R? 0,3—0,4. Aminosav analízis: Asp (1) 0,95; Thr (2) 0,93; Ser (2) 1,75; Glu (4) 4,10; Pro (2) 1,83; lie (1) 1,00; Leu (2) 2,05; Tyr <2) 1,95; Phe <1) 1,0; Lys (2) 2,05; NH3 <3) 3,40. 42 13. példa: Z-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC) -Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro-Glu-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 5 2,58 g (1 mmól) védett oktadekapeptidet (12. példa) feloldunk 100 ml 80%-os ecetsavban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, 10 az oldatot bepároljuk, éterrel eldörzsöljük és szárítjuk. 2,45 g (kb, 100%) anyagot kapunk. B,j 0,10—0,20. A fenti anyagot feloldjuk 5 ml 80%-os vizes dimetilformamidban, mely 0,28 ml (2 mmól) tri-16 etilamint is tartalmaz, majd az alábbi azid-oldathoz adjuk —10°-on: 0,9 g (1 mmól) védett heptapeptidhidrazidot (4. példa) feloldunk 3 ml dimetilformamidban, mely 0,35 ml (2 mmól) 6 N sósavat is tartalmaz, majd —15°-ra hűtve hoz-20 záadunk 0,2 ml (1 mmól) 5 M nátrium-nitritet. A reakcióelegyet 8 perc keverés után 0,84 ml (6 mmól) trietilaminnal lúgosítjuk. Az egyesített oldatokat 1 órán át —10°-on, 1 órán át 0°-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten 25 állni hagyjuk. Másnap az oldatot 0,5 N kénsavval hűtés közben savanyítjuk, a kivált anyagot szűrjük, 0,5 N kénsavval, és vízzel mossuk. A száraz nyersterméket 30 ml metanol és 30 ml meleg víz elegyéből átoldjuk. 2,2 g (67%) anya-30 got kapunk. B.f 0,3.—0,4 (n-butanol-ecetsav-víz -— 10:1:3 rendszerben). Aminosav analízis: Asp (1) 0,96; Thr (1) 0,95; Ser (2) 1,80; Glu 35 (8) 8,15; Ala. (1) 1,00; Pro (2) 1,85; lie (1) 1,00; Leu (2) 2,00; Tyr (2) 1,95; Phe (2) 2,00; Lys (2) 2,05; NH3 (3) 3,10. 40 14. példa: Z-Glu-Glu-Phe-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)-NH2 előállítása 45 2,65 g (2,94 mmól) védett hexapeptidhidrazidból (4. példa) a 12. példában leírt módon azidot készítünk és reagáltatjuk 3,1 g (2,67 mmól) heptapeptidamid-származékkal (3. példa). A reakcióelegyet a 12. példában leírt módon fel-50 dolgozva 4,4 g (82%) védett tridekapeptidamidszármazékot nyerünk. Rí: 0,55—0,65. Aminosav analízis: Glu (6) 6,10; Ala (1) 1,00; Pro (1) 0,92; lie 55 (i) i.oi; Tyr (1) 0,96; Phe (1) 0,98; Lys (2) 2,00; NH3 (2) 2,10. 15. példa: Z-Phe-Asp-Thr-Tyr-Glu-Glu-Phe-60 -Glu-Glu-Ala-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-~Glnr-Lys(BOCyTyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro~ -Glu-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 1,7 g (0,514 mmól) védett tetrakozapeptidami-6§ dot (13. példa) 20 ml 80%-os ecetsavban csont-21
