161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
37 0,93—0,95. A fenti anyagot feloldjuk 7 ml dimetilformamidban és 0°-on hozzáadunk 2,16 ml (43,2 mmól) hidrazin-hidrátot. Három óra állás után a metanolt ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 1 N sósavban és kirázzuk etilacetáttal, 5 majd a mosott vizes oldatot piridinnel pH 7,5— 8-ra lúgosítjuk. Az oldatból éjszakán át kiválik a védett tripeptidhidrazid-klórhidrát, amit kiszűrünk, vízzel mosunk és szobahőmérsékleten szárítunk. 3,71 g (83,5%) anyagot kapunk. Op.: 10 125—129°. R2 0,4—0,5 [aj2 ° —19,8° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C29 H 43 0 5 N 8 -2,5 H 2 0 (M: 664,195) képlet alapján: 15 Számított: C: 52,50%, H: 7,27%, N: 16,88%, Cl: 5,35%. Talált: C: 52,45%, H: 7,05%, N: 16,88%, Cl: 5,40%. 20 4. lépés: ZN-Leu-Ser-OMe előállítása 4,92 g (10 mmól) p-nitrobenziloxikarbonil-leucin diciklohexilammónium sót szuszpendálunk 20 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 0,11 ml 25 (1 mmól) N-metil-morfolint, majd —15°-on 1,32 ml (10 mmól) klórszénsavizobutilésztert. Tíz perc keverés után adjuk hozzá 1,19 g (10 mmól) szerinmetilészter-klórhidrát és 1,4 ml (10 mmól) trietilamin 20 ml dimetilformamidos szuszpenzió- 30 ját. A reakcióelegyet hűtés mellett 1 óra hosszat keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap a sókat kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, a maradékot feloldjuk etilacetátban és mossuk 1 N sósavval, vízzel, 5%-os 35 nátriumbikarbonátoldattal, vízzel, végül szárítjuk nátrium-szulfáton, bepároljuk. A maradékot éterrel kristályosítjuk, szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. 3,47 g (81%) védett dipeptidésztert kapunk. Op.: 141—144°, R* 0,8—0,9. [a]2 ° 1,55° 40 (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C18 H 25 0 8 N 3 (M: 411,404) képlet alapján: 45 Számított: C: 52,54%, H: 6,12%, O: 31,11%, N: 10,2%. Talált: C: 52,27%, H: 6,23%, O: 30,95%, N: 10,09%. 50 5. lépés: ZN-Leu-Ser-NHNH2 előállítása 3,47 g (8,1 mmól) védett dipeptidésztert (4. lépés) feloldunk 8 ml metanolban, majd hozzáadunk 0,81 ml (16,2 mmól) hidrazin-hidrátot. Éjszakai állás után a kivált hidrazidot szűrjük, metanollal, majd éterrel mossuk és szárítjuk. 3,33 g (96%) terméket nyerünk. Op.: 205—208°, R4 0,4—0,5. [a]2 l + 1,38° (c=l, dimetilformamidban). 60 Analízisa: C17 H 25 0 7 N 5 (M: 411,410) képlet alapján: Számított: C: 49,62%, H: 6,13%, O: 27,22%, N: 17,02%. 65 38 Talált: C: 49,63%, H: 6,24%, O: 27,10%, N: 16,96%. 6. lépés: Z-Arg-Leu-Phe-Asp-Asn-Ala-NHNH-BOC-HCl előállítása 4,43 g (6,75 mmól) védett tripeptidésztert (2. lépés) szuszpendálunk 70 ml 50%-os vizes metanolban és hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén az oldatból a katalizátort kiszűrjük, bepároljuk, kétszer benzollal is bepároljuk, majd a maradékot éterrel eldörzsöljük. 2,48 g (85,3%) szabad tripeptid-származékot kapunk. R^. 0,05—0,10. 3,71 g (5,6 mmól) védett tripeptidhidrazidot (3. lépés) feloldunk 10 ml dimetilformamidban, majd —10°-on hozzáadunk előbb 2,8 ml (16,8 mmól) 6 N sósavat, azután 1,12 ml 5 M nátriumnitritoldatot. Tíz perc keverés után a reakcióelegyet semlegesítjük 1,57 ml (11,2 mmól) trietilaminnal és ezt követően adjuk hozzá a fenti szabad tripeptid 2,2 g-ját (5,1 mmól), valamint 0,715 ml (5,1 mmól) trietilamint 10 ml 50%-os vizes dimetilformamidban oldva. Fél órán át —10°-on, majd 2 órán át 0°-on keverjük a kapcsolási elegyet, s végül éjszakán át állni hagyjuk. Másnap az oldatot bepároljuk és a maradékot eldörzsöljük 0,1 N sósavval, szűrjük, vízzel és éterrel mossuk. Szárítás után 4,46 g nyersterméket kapunk. Ezt szuszpendáljuk és 40 ml vízben és 20 ml etilacetát hozzáadása után 2 óra hosszat erősen keverjük. Az anyagot kiszűrjük, etilacetát-vízzel, majd etilacetáttal, s végül éterrel mossuk. 3,89 g (75%) védett hexapeptidet kapunk. R2 f 0,25—0,35. Analízisa: C43 H 67 0 13 N 12 C1 (M: 1019,555) képlet alapján: Számított: N: 16,48%. Talált: N: 16,40%. 7. lépés: ZN'Leu-Ser-Arg-Leu-Phe-Asp-Asn-Ala-NHNH2 előállítása 3,57 g (3,48 mmól) védett hexapeptid-származékot (6. lépés) 50 ml 80%-os ecetsavban hidrogénezünk csontszenes palládium jelenlétében. A katalizátor kiszűrése után az oldószert bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 3,19 g (97%) anyagot kapunk. R*. 0,60—0,65. 1,4 g (3,37 mmól) védett dipeptidhidrazidot (5. lépés) feloldunk 10 ml dimetilformamidban és —10°-ra hűtve hozzáadunk 1,7 ml (10,2 mmól) 6 N sósavat és 0,674 ml (3,37 mmól) 5 M nátrium-nitritet. A reakcióelegyet keverjük —10°on 10 percig, majd —15°-ra hűtve lúgosítjuk 1,88 ml (13,44 mmól) trietilaminnal. A keletkezett szuszpenzióhoz adjuk a fent előállított szabad hexapeptid-származék 3,19 g-ját (3,37 mmól) 10 ml dimetilformamidban oldva. Keverjük fél órán át —10°-on, 2 órán át 0°-on, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. Másnap az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot eldörzsöljük hidegen 0,1 N sósavval, szűrjük, vízzel alaposan kimossuk és szárítjuk. 3,0 19
