161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
29 Tisztítás oszlopkromatografálással: A 4,15 g nyersterméket 200 g szilikagélen etilacetát-piridin-ecetsav-víz (120:2 0:6:11) oldószereleggyel kromatograf áljuk: 1,35 g két-foltos, és 2,39 g tiszta terméket nyerünk. A tisztítás hozama a tiszta termékre számítva 57,5%. Tisztítás Dowex 1x2 ioncserélő gyantán: 20 g (40 ml) Dowex 1x2 acetát ciklusban levő ioncserélő gyantára (2x13 cm-es oszlopra) viszszük a fenti 1,35 g (1,53 mmól) anyagot 60 ml n-BuOH:OMeOH: víz = l:l:lelegyben. Átmossuk 50 ml n-BuOH : víz = 1:1:1 arányú eleggyel. A lecsepegő oldat tartalmazza a szenynyeződést (R* 0,5—0,6). Ezután 150 ml n-BuOH: :MeOH:0,5 N AcOH = 1:1:1 arányú elegyet csepegtetünk az oszlopra. A frakciók anyagtartalmát vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük. 0,88 (65%) tiszta terméket nyerünk így. Az együtt nyert tisza termék hozama a nyerstermékre számolva 81%. Op.: 80—84° (bomlik). [a]2 ° —45,30° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C41 H 53 0 J5 N 7 (M: 883,909) képlet alapján: Számított: C: 55,70%, H: 6,04%, O: 27,15%, N: 11,12%. Talált: . C: 55,10%, H: 6,32%, O: 27,35%, N: 11,24%. 6. lépés: Z(N02 )Glu-Pro-Val-Glu-Phe-Ala-N 2 H 3 előállítása 3,27 g (3,7 mmól) védett hexapeptidésztert 4 ml metanolban melegítés közben feloldunk, majd 0 C° körüli hőmérsékletre hűtve 1,49 ml (29,6 mmól) hidrazin-hidrátot csepegtetünk bele. Kb. 2 óra múlva a reakció lejátszódik, az oldat gelesen beáll. Hozzáadunk még 4 ml metanolt, majd 96%-os ecetsavval közömbösítjük a hidrazin-hidrát felesleget. A gelesen beálló szilárd anyagot 1 N citromsavoldattal eldörzsöljük. Szűrjük és savmentesre mossuk vízzel. 2,84 g (87%) védett hexapeptidhidrazidot nyerünk. Op.: (189) 191—194° (bomlik), R j 0.2— 0,3. [a] 2£ — 41,60° (c=l, dimetilformamidban). Analízisa: C40 H-;! O 14 N 9 (M: 883,909) képlet alapján: Számított: C: 54,50%, H: 6,04%, O: 14,18%, N: 14,18%. Talált: C: 54,03%, H: 6,02%, O: 25,65%, N: 14,08%. 8. példa: ZN-Leu-Ile-Gln-Ser-Trp-Leu-NHNH2 előállítása 1. lépés: Z-Ser-Trp-Leu-NHNH-BOC előállítása 15 ml tetrahidrofuránban feloldunk 3,76 g (15,7 mmól) karbobenzoxi-szerint és —10°-on hozzáadunk 1,74 ml (15,7 mmól) N-metil-morfolint, majd 2,07 ml (15,7 mmól) klórszénsav-izo-30 butilésztert. A reakcióelegyet 10 percig keverjük, majd hozzácsepegtetjük 6,75 g (15,7 mmól) H-Trp-Leu-NHNH-BOC [E. Wünsch, F. Dress, J. Jentsch: Ber. 98, 803 (1965)] 15 ml tetrahid-5 rofurános oldatát. A reakcióelegyet keverjük hűtés mellett 2 óra hosszat, szobahőmérsékleten 1 óra hosszat, majd éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a szuszpenziót bejároljuk, a maradékot 150 ml etilacetátban és 30 ml 1 N citrom-10 sav-oldatban feloldjuk, az organikus fázist még citromsavoldattal, majd vízzel, 5%-os nátriumbikarbonátoldattal, vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradékot diizopropiléterrel mossuk. Szárítás után 5,6 (55%) anyagot 15 kapunk. Op.: 137—139°. R) 0,82—0,87. [a] ^ —18,9° (c=l, dimetilformamidban). Rj^ 0,5— 0,6. Analízisa: C33 H 44 0 8 N 6 (M: 652,730) képlet alap-20 ján: Számított: C: 60,72%, H: 6,79%, N: 12,87%. Talált: C: 60,79%, H: 7,06%, N: 12,85%. 25 2. lépés: Z-Gln-Ser-Trp-Leu-NHNH-BOC előállítása 5 g (7,66 mmól) védett tripeptid-származékot (1. lépés) 70 ml metanolban feloldunk és csont-30 szenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén (R 4 . 0,05—0,1) a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, a maradékról még benzolt is ledesztillálunk, majd 3,6 g (7,8 mmól) karbobenzoxi-glutamin-2,4,5-triklórfeníl-35 észterrel együtt feloldjuk 15 ml dimetilformamidban és szobahőmérsékleten állni hagyjuk éjszakán át. Másnap az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot 20 ml etilacetáttal eldörzsörjük, szűrjük, éterrel mossuk, majd 20 ml etanollal 40 10 percig főzzük, hűtés után szűrjük, etanollal és éterrel mossuk, szárítjuk. 3,8 g (65%) anyagot kapunk. Op.: 230—233°, Rf 0,55—0,64 (kloroform-metanol 8:2). [a]2 ° —9,07 (c=l, dimetilformamidban). 45 Analízisa: C38 H 52 O 10 N 8 (M: 780,860) képlet alapján: Számított: C: 58,47%, H: 6,71%, N: 14,35%. 50 Talált: C: 58,56%, H: 6,80%, N: 14,30%. 3. lépés: Z-Ile-Gln-Ser-Trp-Leu-NHNH-BOC előállítása 55 3,4 g (4,35 mmól) védett tetrapeptid-származékot (2. lépés) és 0,39 g (4,35 mmól) vízmentes oxálsavat feloldunk 25 ml dimetilformamidban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén (R^. 0,10—0,15) a ka-60 talizátort kiszűrjük és az oldatot kb. 15 ml-re betöményítjük. Ezuán hozzáadunk 2,0 g (5,22 mól) karbobenzoxi-izoleucin-p-nitrofenilésztert és 1,2 ml (8,7 mmól) trietilamint, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap 65 az oldatot bepároljuk és a maradékot eldörzsöl-15
