161417. lajstromszámú szabadalom • Eljárás racém prosztaglandin-A-analógok előállítására
161417 25 26 Ezen eljárások közül az egyik főleg a szabadsavaknak a megfelelő alkilészterekből történő előállítására alkalmazható, ahol az alkilgyök 1 — 8 szénatomot tartalmaz. Ez az eljárás abból áll, hogy a VIII., X., XII. vagy XIV. általános képletnek megfelelő alkilésztert a III. törzs (Phylum) 2. osztályába (Subphylum) tartozó valamilyen mikroorganizmus fajta által produkált aciláz enzimrendszer hatásának tesszük ki, majd a savat elkülönítjük. Különösen előnyös speciesek (fajták) erre a célra a Mucorales, Hypocreales, Moniliales és Actinomycetales rendhez tartozók. Ugyancsak előnyösek erre a célra az alábbi családokba tartozó fajták: Mucoraceae, Cunninghamellaceae, Moniliaceae, Nectreaceae, Demetiaceae, Tuberculariaceae, Actinomycetaceae és Streptomycetaceae. Ugyanígy különlegesen előnyösek az Absidia, Circinella, Gongronélla, Rhisopus, Cunninghamella Calonectria, Aspergillus, Penicillium, Sporotrichum, Cladosporium, Fusarium, Nocardia és Streptomyces nemhez tartozó fajták is erre a célra. Az előnyösnek említett rendek, családok és nemek körébe tartozó mikroorganizmusokra példákat a 3,290.226 számú USA szabadalomban találunk. Ezt az enzimatikus észter-hidrolízist úgy valósítjuk meg, hogy a VIII., X., XII. vagy XIV. általános képletű alkilésztereket vizes szuszpenzióban valamelyik fentebb említett mikroorganizmus enzimtartalmú tenyészetével addig rázzuk, amíg az észter hidrolizálódik. Rendes körülmények között a 20—30 C° közötti reakcióhőmérséklet megfelelő. Rendszerin 1 — 20 óra reakcióidő elegendő ahhoz, hogy a kívánt hidrolízis végbemenjen. Többnyire kívánatos a reakcióelegynek levegőtől való elzárása pl. argonnal vagy nitrogénnel. Az enzimet úgy kapjuk meg, hogy a tenyészetből a sejteket „levágjuk", ezt követően mossuk, majd újra szuszpendáljuk a sejteket vízben és azokat felaprítjuk pl. üveggyöngyökkel végzett keveréssel, vagy szónikus vagy ultraszónikus rezgésekkel. A teljes vizes aprítási keveréket enzimforrásként használjuk. Más módszer szerint előnyös módon centrifugálással vagy szűréssel eltávolítjuk a roncsölt sejteket és a vizes szupernatáns folyadékot vagy a szűrletet használjuk. Bizonyos esetekben előnyös, ha a mikroorganizmuskultúra tenyésztését valamilyen alifás sav alkilészterének jelenlétében végezzük — az említett sav 10—20 szénatomot tartalmazhat, míg az alkilgyök 1—8 szénatomos lehet — vagy pedig a tenyészethez ilyen észtert adunk és a tenyészetet további növekedés nélkül tartjuk 1 — 24 órán át a sejtek „levágása" előtt. Ezáltal a termelt enzim néha hatásosabb a VIII., X., XII. vagy XIV. általános képletű észternek szabad savvá történő átalakítására. Az erre a célra alkalmas alkilészterek közül példaképpen a metiloleátot említjük meg. Noha a VIII., X., XII. és XIV. általános képletű vegyületek R14-észterei közül a legtöbbet — ahogy azt az előbbiekben már említettük — nem lehet könnyen hidrolizálni vagy elszappanosítani a megfelelő szabad savakká, mégis bizonyos észterek átalakíthatók más módszerek segítségével szabad savakká. Ezek az észterek a halogénetilészterek, melyekben R14 — CH2 CC1 3 képletű gyök. Ezeket fém cinkkel és valamely 2—6 szénatomos alkánsavval — előnyösen ecetsavval — való kezeléssel alakítjuk át szabad savakká. A cink előnyös 5 fizikai formája a cinkpor. A halogénetilésztert kb. 25 C° hőmérsékleten néhány órán át keverjük a cinkporral, ez rendesen azt eredményezi, hogy a VIII., X., XII. vagy XIV. általános képletű észter halogénetil-gyöke lényegében véve teljesen hidro-10 génre cserélődik. A szabad savat azután a szakmában ismert módszerekkel elkülönítjük a reakcióelegyből. Ezt az eljárást a IX., XI., XIII. és XV. általános képletű vegyületek szabad sav formájában történő előállítására is alkalmazhatjuk, az 15 említett vegyületek megfelelő halogénésztereiből kiindulva. Ezen halogénészterek előállítását az előbbiekben már leírtuk, a XXIX. és XXVII. általános képletű savak XXX. illetve XXXII. általános képletű 20 észterekké történő észterezésének ismertetésénél. A fentiekben már leírtuk, hogy a XVIII. általános képletű gyűrűs ketál-ketonok alkilezése XIX. általános képletű ketonokká („B" reakcióábra) rendesen az x és ß alkilezési termékek elegyét ered-25 ményezi a - CH2 - C=C - A - CH 2 0 - THP általános képletű gyök tekintetében. Azt is ismertettük, hogy ez a két izomer különféle végtermékekhez vezet, nevezetesen az ac-ízomer a PG2 -sorozathoz és a /?-izomer a 8-izo-PG2 -sorozathoz. Ha az egyik 30 vagy a másik sorozatból valamelyik vegyület előállítása előnyben részesített, úgy két módszer áll rendelkezésre a kívánt végtermék előnyös előállításához. Ezen módszerek közül az egyik a VIII. vagy XII. 35 áltaános képletű végtermék — ahol R14 jelentése az előbbiekben megadott, vagy hidrogénatom — izomerizálásából áll. A VIII. vagy a XII. általános képletű vegyületeknek mind az a-izomerjét, mind a /3-izomerjét valamilyen inert cseppfolyós hígító-40 szerben addig tartjuk 0— 80 C° hőmérsékleti határok között olyan bázis jelenlétében, melyet az jellemez, hogy vizes oldatának pH-ja 10 alatti, amíg a kérdéses izomer lényeges mennyiségben a másik izomerré — vagyis az oe-izomer ^3-izomerré, 45 vagy a /3-izomer a-izomerré — izomerizálódik. Előnyös bázisok erre a célra ä karbonsavak alkálifémsói, különösen 2 — 4 szénatomos alkánsavak sói, pl. a nátriumacetát. Az alkalmas folyékony inert higítószerek példái az 1 — 4 szénatomos alkanolok, 50 így pl- az etanol. Ez a reakció kb. 25 C° hőmérsékleten kb. 1—20 napot vesz igénybe, és nyilvánvalóan egyensúlyi reakcióról van szó. A két izomer (a. és ß) elegyét ismert módszerekkel különítjük el a reakcióelegyből, majd a két izomert ugyancsak 55 ismert módszerekkel, pl. kromatografálással, átkristályosítással vagy ezek kombinációjával, elválasztjuk egymástól. A kevésbé kívánt izomert azután ugyanilyen izomerizációnak vetjük alá, hogy a kívánt izomerből többet kapjunk. Ily módon, 60 ismételt izomerizációs és elválasztási műveletekkel lényegében véve az összes nem kívánt VIII. illetve XII. általános képletű izomert álatalakítjuk a kívánt izomerré. A másik módszer a VIII. vagy a XII. általános 65 képletű vegyületek kívánt izomerjének előnyös elő-13
