161311. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolo- benzodiazepinon-származékok előállítására

161311 hogy a DNS vírus virulenciáját a 11-metoxi-vegyület részben vagy teljesen elpusztítja. A 11-metoxi-vegyület továbbá többfajta átültethető aszcitikus tumorral szemben teljes gátlást mutat [pl. Ehrlich Carcinoma és Cr. Sarcoma 180 " egéren (NMRJ törzs) és Yoshida Sarcoma AH 66 R és AH 130 törzs Wistar patkányon]. A vegyület a szilárd Walker Carcino Sarcomával szemben intratumorálisan adagolva ugyancsak hatásos. A vegyület az L 1210—S és L 1210—R 10 (6-merkaptopurin rezisztens) leukémia törzseket részben gátolja; 0,125 mg/kg i. p. (napi 4 adagolás 4 egymás után következő napon) dózissal a túlélés L 1210—S esetében 26—50%-kal és L 1210—R esetében 51—75%-kal meghosszabbít- 13 ható. Valamennyi, átültethető aszcitikus tumortörzzsel végrehajtott tesztnél az egereket vagy patkányokat meghatározott mennyiségű sejttel vagy sejtanyaggal Hanks oldatban ültetjük át, 100%-os hatást előidéző dózissal. Dózisonként 20 8—8 patkányból vagy 10—10 egérből álló csoportok állatait először 4 órával átültetés után kezeljük a 11-metoxi-vegyület megfelelő dózisával, majd a vegyületet ugyanebben a dózisban 3 egymás után következő napon alkalmazzuk. 25 Az oldatokat trietilénglikol és desztillált víz (90%) elegyével készítjük. Egyetlen dózist 0,5 ml/20 g egér és 1 ml/100 g patkány értékben adunk be, majd kg-ra számítjuk át. A 11-metoxi-vegyület aktivitása a dózistól 30 függ, azonban 99'%-os gátlás Ehrlich Carcinoma és Cr. Sarcoma 180 (egér) aszcitikus tumorokon még 0,0625 mg/kg i. p. dózisban, és Yoshida Sarcoma AH 66 R és Yoshida Sarcoma AH 130 (patkány) tumorral szemben még 0,1, ül. 0,05 35 mg/kg i. p. dózisban is fellép. A kemoterápiás vizsgalatok azt mutatják, hogy a teszt-állatok a fenti dózisokat jól elviselik. A találmányunk tárgyát képező eljárással elő- 40 állítható vegyületeket a gyógyászatban az antibiotikumot vagy származékát és gyógyászati szempontból alkalmas, szilárd vagy folyékony, orális vagy parenterális beadagolásra alkalmas hordozóanyagokat tartalmazó gyógyászati ké- 45 szítmények formájában alkalmazhatjuk. A készítményeket szilárd (pl. kapszula, tabletta vagy drazsé) vagy folyékony (pl. oldat, szuszpenzió vagy emulzió) alakban készíthetjük ki. A készítmények kívánt esetben segédanyagokat (pl. 50 konzerváló, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgálószereket, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat és puffereket) is tartalmazhatnak. A hatóanyag adagolása az alkalmazott vegyülettől, valamint a beteg korától és állapotától függ; 55 a találmányunk tárgyát képező eljárással előállítható vegyületeket általában kb. 20 mcg/kg napi dózisban alkalmazhatjuk. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a pél- 60 dákra korlátoznánk. 1. példa Streptomyces achromogenes var. tomaymyceticus ATCC 21353 agáron fejlesztett vegetatív (55 10 tenyészetét és spóráit 500 ml-es lombikba viszszük át, mely 100 ml, alábbi összetételű táptalajt tartalmaz: Komponens súly % laktóz 3 húsextrakt 1 élesztőextrakt 1 pepton 1 nátriumklorid 0,25 A táptalajt sterilezzük és agárral inokuláljuk, majd 3 napon át 30 C°-on rázatjuk. 2 tonnás rozsdamentes fermentorba 1000 liter alábbi összetételű táptalajt helyezünk: Komponens súly % laktóz 3 húsextrakt 1 élesztőextrakt 1 pepton 1 nátriumklorid 0,25 káliumdihidrogénfoszfát 1,5 nátriumdihidrogénfoszfát (12 Ha

O) 0,43 A táptalaj pH-ját 6,1-re állítjuk be. A tenyészetet nyomás alatt 30 percen át 120 C°-on történő hevítéssel sterilezzük. A táptalajt lehűtjük és a fenti inokulumtenyészet 1 ml-ét aszeptikus körülmények között hozzáadjuk. Az organizmust a táptalajban 50—60 órán át 30 C°-on tenyésztjük. Ez alatt az idő alatt a táptalajt keverjük és kb. 1000 liter/perc sebességgel steril levegőt fúvatunk át; 350 fordulat/perc fordulatszámú propeller keverőt üzemeltetünk. A fermentáció lejátszódása után a micéliumot centrifugálással eltávolítjuk. A felül elhelyezkedő réteg hatóanyagtartalmát 5 kg aktív szénnel 30 percen át keverve megkötjük. Az elegyet szűrjük, az aktív szenet 100 liter 10:3:80:10 arányú piridin :ammónia:etanol:víz eleggyel 45 C°on 30 percen át extraháljuk, majd az aktív szenet ismét extraháljuk. Az extraktot vákuumban 50 C°-on betöményítjük és fagyasztva szárítással 1,6 kg porszerű terméket kapunk. A porszerű anyagot kb. 10 liter n-hexánnal mossuk, vízben oldjuk és az oldat pH-ját 2—3 értékre állítjuk be. A megsavanyított oldatot 4x5 liter kloroformmal extraháljuk. A kloroformos extraktot 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban 50 C°-on betöményítjük. Az olajos maradékot petroléterrel kezeljük, a petroléteres oldatot szűrjük. A kapott, kb. 20 g súlyú port 100 ml etilacetátban oldjuk és kovasav oszlopon való adszorpció után kb. 8 liter etilacetáttal eluáljuk. Az eluátumot közel szárazra pároljuk, majd kb. 30 ml metanolt adunk hozzá. A metanolos oldatot 2 napon át —20 C°-on tartjuk, a kiváló csapadékot szűrjük. A kapott, kb. 1,8 g súlyú nyers kristályos anyagot kb. 30 ml meleg metanolban oldjuk. A metanolos oldatot 2 napon át kb. —20 C°-on állni hagyjuk. A kapott termék 1,2 g kristályos 1,2,3,10,11,-lla-hexahidro-2-etilidén-7,11 -dimetoxi-8-hidroxi-pirr olo [2,1-c] [l,4]benzodiazepin-5-on. O. p. 145—146,5 C° (bomlás). 5