161251. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sejtmentes penicillinaciláz előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. II. 13. (AA—634) Nagy-Britannia-i elsőbbségei: 1968. II. 15. (7544/68); 1968. XII. 03. (57373/68) Közzététel napja: 1972. III. 28. Megjelent: 1973. december 31. 161251 Nemzetközi osztály: C 07 g 7/028. *«;ti«»* Feltaláló(k): Délin Per Staffan, Ekström Bertil Ake, Sjöberg Berndt Olof Harald, Thelin Karl Hugo, Nathorst-Westfelt Lars Solve, vegyészek, Södevtälje, Svédország Tulajdonos: Aktiebolaget Astra cég, Södertälje, Svédország Eljárás sejtmentes penicillinaciláz előállítására 1 A találmány tárgya javított eljárás penicillinek oldalláncait csökkent allergen hatású penicillinek előállítására alkalmas 6-aminopenicillánsav (6-APS) keletkezése közben eltávolítani képes sejtmentes enzimkészítmény előállítására, tisztítására és elkülönítésére. Közelebbről a találmány egy enzimkészítménynek Escherichia coliból való előállítására és 6-APS-nek benzilpenicillinből való előállításához történő felhasználására vonatkozik. Ismeretes, hogy számos mikroorganizmus — baktérium és gomba — olyan enzimeket termel, amelyek képesek a penicillinek 6-helyzetében levő amidkötés hidrolizálására; ezeket általában penicillinacilázoknak vagy penicillinamidázoknak nevezik [lásd J. M. T. Hamilton-Miller öszszefoglaló cikkét, Bacteriological Reviews 30, 761 (1966)]. Jelenleg 6-APS-nek az ipari előállítására általában az acílázt vagy amidázt tartalmazó E. coli sejtek szuszpenzióját használják. Ezeknek az eljárásoknak azonban számos hátrányuk van. Minthogy az enzim túlnyomórészt a sejteken belül van, a penicillinnek szükségszerűen előbb be kell hatolnia a sejtekbe, hogy reagálni tudjon az enzimmel, aminek lassúbb reakció a következménye. Ezenkívül a törzs más enzimeket is tartalmazhat, amelyek hatástalanít ják a penicillint vagy a 6-APS-t azáltal, hogy felhasítják a /J-laktámkötést, vagy szenynyezik a sejttenyészetet az ilyen enzimeket ter-10 15 20 25 30 melő organizmussal. Minthogy az aciláz csak igen kis része a sejttartalomnak, a teljes mikroorganizmusokat alkalmazó eljárásnak az is gyakorlati hátránya, hogy nagy mennyiségben kell olyan anyagot használni, amely hatástalan a folyamatban. A teljes mikroorganizmusok használata során tapasztalt további hátrány az, hogy egy további lépést kell ta félig szintetikus penicillinek előállítására szolgáló műveletsorozatokhoz kapcsolni, nevezetesen a mikroorganizmusnak a folyékony reakcióterméktől való elválasztását (például szűréssel), amikor az eredeti oldalláncot lehasították a bioszintetikus úton készült penicillinekről. További hátrány a penicillánsav-veszteség, részben a sejteken való adszorpció, részben a sejt anyagcseréje közben termelt anyagok okozta degradáció következtében. Teljes sejteknek a 6-aminopenicillánsav bioszintetikus penicillinek előállítására való használata során felmerülő további nehézség az, hogy a savnak a lehasítási reakció egyéb termékétől való elválasztása igen körülményes. így például Batchelor és munkatársai [Lancet I., 1968,1175J azt tapasztalták, hogy a teljes sejtek alkalmazásával kapott 6-APS emberben és állatokban veszedelmes allergen reakciók kiváltására képes, fehérje jellegű szennyezéseket tartalmazhat. Ha ilyen szennyezett 6-APS-ből készülnek penicillinek, a szennyezések visszamaradhatnak 1R19F.1