161202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás janiemicin antibiotikum előállítására
161202 3 4 1. táblázat Streptomyces macrosporeus ATCC 21388 tenyésztési sajátságai Közeg W 7. napon Élesztőkivonat- Légmicélium fehér, megszürkül, -malátakivonat agar Fonák színtelen. Nincs oldható pigment. Zabliszt agar Szervetlen sókkeményítő agar Növekedés gyenge, színtelen fehér széllel, szükés középen. Fonák színtelen. Nincs oldható pigment. Légmicélium szürke széllel. Fonák világos olajbarna. Glicerin-aszparagin Nincs spóraképződés. Fonák agar színtelen. Nincs oldható pigment. 14. napon Spóraképződés jó, szürke<2) . Fonák sárgásbarna. Nincs oldható pigment. Növekedés gyenge, spóraképződés gyenge, szürkés sugárzó széllel. Fonák világos sárgászöld. Spóraképződés szürke <2) . Fonák sárgásbarna vagy zöldesfekete, olajbarnás, nincs oldható pigment. Spóraképződés világosszürke(2) . Fonák színtelentől világos sárgásbarnáig. Nincs oldható pigment. (1) Ezek a közegek a Streptomyces rendszertanban használt és az International Streptomyces Project által a tenyészetek leírásának szabványosítása céljából ajánlott standard táptalajok. Öszszetételüket közlik a következő helyen: E. B. Shirling és D. Gottlieb: „Methods for Characterization of Streptomyces Species" [International J. Syst. Bacteriol. 16, 313—340 (1966)]. (2) A pontos színmegjelölés világos barnásszürke (63) ISCC—NBS. [K. L. Kelly és D. B. Judd: „The ISCC—NBS method of designating colors and a dictionary of color names", NBS Circular 553 (1955)] vagy a Color Harmony Manual [Fourth Color Harmony Manual, Container Corporation of America, Chicago (I960)] 3 fe színmintája. A Streptomyces macrosporeus ATCC 21388 hasznosítani képes a következő szénforrásokat Pridham és Gottlieb standard módszere szerint kipróbálva: glukóz, mannit, inozit, xilóz, arabinóz, ramnóz, fruktóz, galaktóz és trehalóz. Növekedését nem segítik: szorbit, raffinóz, melibióz, szacharóz és laktóz [T. G. Pridham és D. Gottlieb: „Utilization of Carbon compounds by some Actkiomycetales as an aid for species determination", J. Bacteriology, 56, 107—114 (1948)]. Gyengén hidrolizálja a keményítőt, mérsékelten képes fehérjét hidrolizálni, és hidrolizálja a kalciummalátot. Nitrátokat redukál, és tűri a 9%-os sóoldatot. A Streptomyces macrosporeus ATCC 21388 baktériumok ellen hatásos antibiotikumot termel. Ezt az antibiotikumot janiemicinnek neveztük el. A janiemicin bázisos anyag, és anionokkal sókat képez. Ilyen anionok például a halogenidok, acetátok és szulfátok. Janiemicin antibiotikum termelésére Streptomyces macrosporeus ATCC 21388-at előnyösen 25 °C-on, süllyesztett aerob körülmények között, asszimilálható szénhidrátot és egy nitrogénforrást tartalmazó vizes táptalajban tenyésztünk. A tenyésztés időtartama kb. 144 óra, ennek végén az antibiotikum a fermentleben található. A fermentálás befejeztével a fermentléhez 5 szűrést elősegítő anyagot adunk és megszűrjük. Az antibiotikumot a micéliumból álló szűrőlepényből metanollal extraháljuk. Az antibiotikum nemcsak a szűrőlepényben található, hanem a szüredékben is. Ennélfogva a szüredéket vízzel 10 telített n-butanollal extraháljuk. A butanolos és a metanolos kivonatokat vákuumban bepároljuk, és így mindkettőből vizes szuszpenziót kapunk. A szuszpenziókat egyesítjük, és a keveréket vízzel telített n-butanollal extraháljuk. A butanolos 15 fázist vákuumban minitnális térfogatra koncentráljuk, és a koncentrátumot legalább 10 tf acetonnal hígítjuk. Az acetonban oldhatatlan csapadékot szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk, és vákuumban megszárítva amorf, világos-20 barna port kapunk. Az acetonban oldhatatlan por tovább tisztítható négycsöves ellenáramú megosztással n-butanol és víz alkalmazásával. Az aktivitás legnagyobb 25 része az első két cső n-butanolos fázisaiban van. Az oldószert eltávolítva amorf szilárd anyagot kapunk. Ez az anyag tovább tisztítható kovasavgélen kromatografálva, először propanol-butanol elegy-30 gyei, majd propanol-butanol-n-ammónia-oldat eleggyel eluálva, Az utóbbi oldatrendszer végül eluálja az aktív anyagot; ez oldószertől mentesen amorf szilárd termék. Még további tisztítás lehetséges Sephadex 35 G—50-en való kromatografálással dimetilszulfoxidban (Sephadex G—50, poliszacharid molekulaszita, a Pharmacia Fine Chemicals, Inc. New Market, New Jersey terméke). A találmány szerinti eljárás végrehajtását rész-40 letesen szemléltetik a következő példák. 2
