161173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok előállítására
161173 17 18 A sóelegy vízben oldódik, és disszociált, vagy jyengén asszociált állapotban van jelen. A 2. példa A. lépésében kapott, nedves termékhez 75 ml fenol és 3 ml víz +20 C°-os elegyét adjuk, és az elegyet 5 percig közömbös gáz at- 5 moszférában, fénytől védve keverjük. A kapott átlátszó, pH=7 értékű oldathoz 2,5 g káliumhidrogénkarbonátot adunk, és az elegyet 10 percig keverjük. A kapott 8,2 pH-értékű oldat disszociált vagy gyengén asszociált állapotban R 10 és Z helyén egyaránt metil-csoportot tartalmazó (VII) általános képletű vegyület-káliumsót, és R és Z helyén egyaránt metil-csoportct tartalmazó (IA) általános képletű vegyület-káliumsót tartalmaz. Az egyes vegyületek megfelelő módszerek- 15 vei elkülöníthetők egymástól, C. lépés: (III) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása. A só vízben oldhatatlan, és erősen asz- 20 szociált molekula-aggregátumokat képez. A 2. példa B, lépésében kapott oldathoz keverés közben, közömbös gáz atmoszférában 50 ml vizet, 10 g káliumhidrogénkarbonátot, 25 ml 95%-os alkoholt és 75 ml acetilacetont tártai- 25 mázó oldatot adunk, és az elegyet 7 napig 25 C°on keverjük. Az elegy pH-értéke 8,6. Az elegyet centrifugáljuk, a szilárd maradékot vízzel eldörzsöljük, a felső folyadékréteget eltávolítjuk, a csapadékot vízzel, acetonnal majd éterrel mos- 30 suk, nitrogénáramban szárítjuk, végül éjszakán át szobahőmérsékleten vákuumban szárítjuk. 2,37 g (90%) terméket kapunk, amely az R és Z helyén egyaránt metil-csoportot tartalmazó (III) általános képletű vegyület káliumsója. A termék 35 vízben oldhatatlan, és erősen asszociált molekulaaggregátumokat képez. A termék fehér, por alakú, vízben és a szerves oldószerek többségében oldhatatlan, 0,1 n nátriumhidroxid-oldatban pH=ll—12 értékben old- 40 ható anyag. Elemzés: Savval felszabadítható acetilaceton: 3,9% (=2,3 mól/mól) Szabad guanidin-tartalom: 3,7% 45 Oldószertartalom: 3,2% Szulfáthamu: 6,6% (elméleti mennyiség 6 Iratomra: 8,3%) Ultraibolya spektrum (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és nátrumhidroxid-oldat elegyében; 50 kloridion-koncentráció: 0,003 n): 1% 1 cm El% =90 1 cm 55 Cirkuláris dichroizrmis (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében, pH=ll értékben): A El0 /° X103 320 millimikronnál•= 39,7 1 cm 60 296 millimikronnál = + 16,6 216 millimikronnál = —473 195 millimikronnál = +957 A dichroizmus-görbén nem jelenik meg negatív maximum 222 m/^-nál. 65 Inflexió kb. 238 millimikronnál Maximum 308 millimikronnál E, = 92 Papírkromatográfia: Előhívószer: brómfenolkék Oldószer: 1:1 arányú szék. butanol — 10%-os ecetsav elegy; ül. 4:1:5 arányú n-butanol — ecetsav — víz elegy felső fázisa (a papírt az alsó fázissal impregnáljuk). A termék R,. értéke mindkét esetben nulla. Tudomásunk szerint e vegyületet a szakirodalom eddig nem ismertette. D. lépés: (IA) általános képletű vegyület (R és Z egyaránt metil-csoportot jelent) káliumsójának előállítása. A só vízben oldódik, és disszociált, vagy gyengén asszociált állapotban van jelen. 75:20:5 arányú fenol — víz — In vizes káliumhidroxid-oldat elegyébe (össztérfogat: 156 ml, pH=8) 2,30 g, a 2. példa C. lépésében előállított terméket adagolunk, és az elegyet közömbös gáz atmoszférában, fénytől védve, 20 C°-on 15 percig keverjük. Az elegyet szűrjük, nitrogénatmoszférában, keverés közben 1560 ml acetont adunk hozzá, az elegyet 15 percig állni hagyjuk, majd a felső folyadékréteget elkülönítjük. A csapadékot centrifugáljuk, acetonnal, majd éterrel mossuk, nitrogénáramban szárítjuk, végül éjszakán át vákuumban szárítjuk. 2,27 g (96%) vízben oldódó, oldatban disszociált vagy gyengén asszociált állapotban jelenlevő terméket kapunk, amely az R és Z helyén egyaránt metilcsoportot tartalmazó (IA) általános képletű vegyület káliumsója. A kiindulási inzulin mennyiségére számított hozam: 86%. A termék vízben és fiziológiás szérumban 20%nál nagyobb mennyiségben oldódó, a szerves oldószerek többségében oldhatatlan fehér por. Elemzés: Oldószertartalom: 6,7% Szabad guanidin-tartalom: 3,7% Savval felszabadítható acetilaceton: 4,1% (=2,45 mól/mól) Szulfáthamu: 8—8,2% (elméleti érték 6 K-atomra: 8,35%) Ultraibolya spektrum: (0,15 mólos vizes NaCloldat és 0,1 n vizes NaOH-oldat elegyében, klorid-ion koncentráció: 0,003 n): Inflexió kb. 231 millimikronnál ^ ic ° m = 108 Maximum 308 millimikronnál E1 /o =87 1 cm A termék az ultraibolya spektrum alapján a következő csoportokat tartalmazza: R—NH—C=C—COCH3 , I CH, R-NH es RCirkuláris dichroizmus: a) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében, pH=ll,4: A E l0// ° XI03 317 millimikronnál = + 3,9 1 cm 218 millimikronnál = —185. 207 millimikronnál =• —473r 194 millimikronnál = +296 9
