161173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok előállítására
161173 25 A szilárd anyag 3 perc alatt teljesen feloldódik. Az elegyhez 10 térfogatrész acetont adunk, a kivált terméket centrifugálással elkülönítjük, acetonnal, majd éterrel mossuk, közömbös gáz áramban szárítjuk, majd vákuumban szárítjuk. 5 135 mg (96%) fehér, por alakú, vízben oldódó, oldatban disszociált vagy gyengén asszociált állapotban jelenlévő terméket kapunk, amely az R és Z helyén metil-csoportot, és X és Y helyén együttesen trimetilén-csoportot tartalmazó (IB) 10 általános képletű vegyület káliumsója. Összegképlet: C277 H3 93 0 78 N Ö5 S 6 K Ö = 6308,44 Szulfáthamu: 7,7—7,5% (elméleti érték: 8,3%) Az amino-csoportok blokkolásának ellenőrzése 15 N-diaminonaftil-szulfonálással: 30 mg, a fenti módon előállított vegyületet diaminonaftilszulfonilkloriddal reagáltatunk. 21 mg diaminonaftilszulfonált származékot kapunk. 10 mg, így kapott vegyületet 17 órán át 100 C°-on 1 ml 6 n 20 vizes sósavoldattal hidrolizálunk, majd a hidrolizált terméket kromatografálásnak vetjük alá. Eluálószerként 45:35:20 arányú metilacetát — izopropanol — ammónia elegyet alkalmazunk. A kromatogramban sem a glicin, sem a fenilalanin, 25 sem a lizin diaminonaftilszulfonált származéka nem jelenik meg, ennek megfelelően a terminális amino-csoportok blokkolása teljes mértékben végbement. Cirkuláris dichroizmus: 30 a) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében, kloridion koncentráció: 0,003 n: .1% AEJ 'c " m X 103 220 millimikrónnál = — 181 Inflexió kb. 223 millimikronnál E = 123 Maximum 284 millimikronnál E 1 cm 35 40 204—205 millimikronnál = — 358 b) 0,1 n vizes sósavoldatban: AE}°/O X10 3 287 millimikronnál = — 11,6 1 cm 221 millimikronnál = — 210 207 millimikronnál = — 280 195 millimikronnál = + 483 A cirkuláris dichroizmus-görbén kb. 222 millimikronnál negatív maximum jelenik meg, azaz a termék részben helikoidális szerkezetű. 45 Ultraibolya spektrum: a) 0,1 n sósavoldatban: -.0/ 1 cm 1% = 109 50 55 b) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében, kloridion koncentráció: 0,003 n: 0 , Maximum 238 millimikronnál E { ° m = 89 Maximum 289 millimikronnál E * /0 =136 1 cm Papírkromatográfia: Oldószer: 1:1 arányú szék. butanol — 10%-os vizes ecetsavoldat elegy. A papírt 10%-os vizes 60 ecetsav-oldattal impregnáljuk. Egyetlen folt jelenik meg, amelynek R^ értéke az inzulinénál kismértékben kisebb. Tudomásunk szerint ezt a vegyületet a szakirodalomban eddig nem ismertették. 65 26 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) általános képletű inzulin-származékokból képzett, vízben oldódó, oldatukban az inzulinhoz hasonlóan disszociált vagy gyengén asszociált állapotban levő sók, valamint az (I) általános képletű, disszociált vagy gyengén asszociált állapotban levő, szabad inzulin-származékok előállítására — ahol X és Y egymástól függetlenül 1—4 szénatomos alkil-gyököt jelent, vagy X és Y együtt 2—3 szénatomos polimetilén-csoportot képez, Z és R egymástól függetlenül 1—4 szénatomos alkil-gyököt jelent —, azzal jellemezve, hogy az inzulint gyengén lúgos, homogén, vizes-alkoholos közegben Z— CO—CH2— CO—R általános képletű yS-diketonnal kondenzáltatjuk — ahol Z és R jelentése a fent megadott —, a kapott (III) általános képletű vegyület alkálifémsóját — ahol Z és R jelentése a fent megadott, és amely vízben oldhatatlan, és erősen asszociált molekula-aggregátumokat képez — pH~8 értéken, alkálihidroxid jelenlétében fenollal vagy helyettesített fenol-származékokkal kezeljük, a kapott (IA) általános képletű vegyület alkálifémsóját — ahol Z és R jelentése a fent megadott, és amely disszociált vagy gyengén aszszociált állapotban van jelen — kívánt esetben savval óvatosan hidrolizáljuk, a kapott (IV) általános képletű inzulin-származékot — ahol R és Z jelentése a fent megadott, és amely vízben oldódik és oldatában disszociált vagy gyengén aszszociált állapotban van jelen — homogén vagy heterogén, gyengén savas vagy gyengén lúgos közegben X—CO—CH2— CO—Y általános képletű /?-diketonnal reagáltatjuk — ahol X és Y jelentése a fent megadott —, a kapott (V) általános képletű vegyületet — ahol X, Y, R és Z jelentése a fent megadott, és amely a reakció és az elkülönítés pH-jától függően szabad fehérje vagy só alakjában képződik, és többé-kevésbé erősen asszociált molekula-aggregátumokat képez — pH~8 értéken, alkálifémhidroxid jelenlétében fenollal vagy helyettesített fenol-származékkal kezeljük, majd kívánt esetben a kapott (IB) általános képletű vegyület alkálifémsóját vagy az (IA) általános képletű vegyület alkálifémsóját ismert módon más szerves vagy szervetlen bázisokkal képezett, vízben oldódó sóvá vagy szabad fehérjévé alakítjuk át. (Elsőbbsége: 1969. december 9.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypontban meghatározott vegyületek előállítása során az (IB) általános képletű inzulin-származékot Z—CO—CH2— CO—R általános képletű /?-diketonnal kondenzáltatjuk — ahol Z és R jelentése az 1. igénypontban megadott. (Elsőbbsége: 1969. március 7.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja (VIII) általános képletű, vízben oldódó, oldatban disszociált vagy gyengén asszociált állapotban levő inzulin-származék — alkálifémsók előállítására — ezek az (IB) képletnek megfelelő vegyületek X helyén R- csoportot, Y 13
