161173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inzulin-származékok előállítására
161173 21 punk, ameíy a (X) képletű vegyület hidrokloridja. Elemzés: C259H3 g 7 0 7 5N 65 S 6 Cl 6 képletre (M = 6016,33) Számított: C = 51,8% H = 6,5% Cl = 3,5% Talált: C = 51,9% H = 6,8% Cl = 4,1% Súlyveszteség vákuumban 100 C°-on: 4,8% Cirkuláris áichroizmus (0,15 mólos vizes nátriumklorid-öldat és 0,1 n nátriumhidroxid-oldat elegyében, az elegy klorid-ion koncentrációja 0,003 n): 1% AV, ° X 103 222 millimikronnál 174 '1 cm' 207—208 millimikronnál = — 378 194 millimikronnál = + 435 A 222 millimikronnál fellépő negatív maximum aira utal, hogy a termék, az inzulinhoz hasonlóan, részben helikoidális szerkezetű. Ultraibolya spektrum (0,1 n vizes sósavoldatban): 1% Inflexió kb. 271 millimikronnál E x '^ = 13,8 1% Maximum 275 millimikronnál E , cm = 15,4 Inflexió kb. 282 millimikronnál E j ^m = 12,6 1% Maximum 306 millimikronnál E j ^m == 8,4 Ultraibolya spektrum (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n nátriumhidroxid-oldat elegyében, az elegy klorid-ion koncentrációja: 0,003 n): ,1% Maximum 234 millimikronnál Ej cm 99 ,1% Maximum 293—294 millimikronnál Ej cm = 25,9 Papírkromatográf ia: a) Oldószer: 4:1:5 arányú n-butanol — ecetsav — víz elegy. A papírt az oldószer alsó fázisával impregnáljuk, a futtatást a felső fázissal végezzük. A termék R,. értéke közel azonos az inzulinéval. b) Oldószer: 1:1 arányú szék. butanol — 10%-os vizes ecetsavoldat elegy. A papírt 10%-os vizes ecetsav-oldattal impregnáljuk. A termék Rf értéke az inzulinénál valamivel kisebb. 5. példa (X) képletű vegyület káliumsójának előállítása. A termék vízben oldódik, és disszociált, vagy gyengén asszociált állapotban van jelen. 300 mg, a 3. példában előállított hidrokloridsót 30 ml vízben oldunk. Az oldat pH-értéke 2,66. Az elegy pH-értékét 1,5 ml 0,1 n vizes ríátriumhidroxid-oldattal 5,2-re állítjuk. A lúgoldatot közömbös gáz-atmoszférában, 20 C°-on, keverés közben adjuk az oldathoz. Az elegyet 3 percig centrifugáljuk, a felső folyadékréteget élönt j ük, a maradékot vízzel mossuk és ismét centrifugáljuk. Á centrifugálási maradékot közömbös gáz-atmoszférában, keverés közben 15 ml fenol és 1 ml 1 n vizes káliumhidroxid-oldat elegyében oldjuk, &z oldathoz 200 ml acetont adunk, a csapadékot acetonnal, majd éterrel mossuk, nitrogénáramban szárítjuk, végül éjszakán át vákuumban szárítjuk. 276 mg ' (92%)' színte-15 22 len, por alakú, vízben és fiziológiai szérumban oldható, szerves oldószerékben oldhatatlan terméket kapunk, amely a (X) képletű vegyület káliumsója. A só oldatban disszociált vagy gyen-5 gén asszociált állapotban van jelen. Elemzés: Szulfáthamu: 7,3—7,6% (elméleti érték 6 Iratomra: 8,6%). Súlyveszteség vákuumban 100 C°-on: 5,7%. 10 Ultraibolya spektrum: (0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxidoldat elegyében; az elegy klorid-ion koncentrációja 0,003 n): 1% Maximum 237 millimikronnál E 1 cm 1% ==89 Maximum 294 millimikronnál Ej = 19,5 0,1 n vizes sósavoldatban: Maximum 307 millimikronnál E 1% 1 cm = kb - 9 ' 7 20 A spektrum adataiból megállapítható, hogy a termék molekulánként egy pirimidmil-csoportot tartalmaz, és oxoenamin-csoportokat nem tartalmaz. Cirkuláris áichroizmus: 25 a) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldat és 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat elegyében; az elegy klorid-ion koncentrációja 0,003 n (pH = 11): 1% 30 AE l 'cm * 103 220 millimikronnál = 253 35 AE lcm 208 millimikronnál = — 384 193 millimikronnál = + 425 b) 0,1 n vizes sósavoldatban (pH = 2): 1% X103 270 millimikronnál = 4,4 221 millimikronnál =— 180 208 millimikronnál = — 217 195 millimikronnál = + 498 c) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldatban 40 (pH = 7,35): 1% AE 1 cm X103 267 millimikronnál = — 6,0 220 millimikronnál = — 203 208 millimikronnál = — 281 45 A cirkuláris dichroizmus-görbén. — a természetes inzulinéhoz hasonlóan — kb. 222 millimikronnál inflexió lép fel. Papírkromatográfia: a) Oldószer: 4:1:5 arányú butanol — ecetsav — 50 víz elegy. A papírt az alsó fázissal impregnáljuk, a futtatást a felső fázissal végezzük. Élőhívószer: brómfenolkék. Egyetlen folt jelentkezik, amelynek R- értéke azonos az inzulinéval. b) Oldószer: 1:1 arányú szék. butanol — 10%-55 os vizes ecetsavoldat elegy. Előhívószer: brómfenolkék. Egyetlen folt jelentkezik, amelynek R f értéke azonos az inzulinéval. Tudomásunk szerint ezt a vegyületet a szakirodalomban mindeddig nem írták le. 60 6. példa (IB) általános képletű vegyület káliumsójának előállítása (Y, Z és R egyaránt metil-csoportot,X izopropil-csoportot jelent). A termék vízben oldódik, és disszociált, vagy gyengén asszociált 65 állapotban van jelen. 11
