160867. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inhibiciós tulajdonsággal rendelkező Nalfa-acetil-2-0-metiltirozin- oxitocin előállítására
3 160867 4 képletű Na-acetil-2-O-metiltirozin-oxitocin előállítására, oly módon, hogy a CH3 I : H — Cys — Tyr — Ileu — Glu — Asp — Cys — Pro — Leu — GlyNH2 (II) (II) képletű 2-0-metiltirozin-oxitocint az ecetsav valamely aktív észterével, előnyösen 5-klór-kinolin-8-acetáttal, vagy anhidridjével vagy halogenidjével dimetilformamidban, 0 — + 5 C° hőmérsékleten reagáltatjuk. Az új oxitocin-analóg — mint fentiekből látható — a kereskedelmi 2-0-meültirozin-oxitocinból (metiloxitocin) megfelelő aciiezőszerrel, előnyösen 5-klórkinolin-8-acetáttal vagy az ecetsav anhidridjével vagy halogenidjével egyszerű szintézis útján előállítható. Az új Na-acetil-2-O-metiltirozin-oxitocin izolált patkányméhen végzett kísérletekben, az Oxitocin aktivitásának meghatározását a szokásos körülmények között végezve: 0,5 mM Ca++, 25 C°, az összehúzódást izometrikusan vagy izotónikusan regisztrálva — uterotonikus aktivitást nem mutatott. A találmány szerinti vegyületet az (oxitocinnál 15—30-szor nagyobb koncentrációban) az Oxitocin adagolása előtt 3—4 perccel az infúziós oldathoz adva, az mint inhibitor működik. Az oxitoxin hatásgörbéjének az új vegyület jelenlétében történő, azzal összhangban levő eltolódása nagy valószínűséggel az inhibició kompetitív típusára utal. 50 jug Na-acetil-2-O-metiltirozin-oxitocin patkányméhben in vivo (estrus vagy proestrus) 5— 10 percen át gátolta az összehúzó hatást, amit Oxitocin infúzióval (1—2 N. E/óra) idéztünk elő. Ha a találmány szerinti vegyületet infúzióban alkalmaztuk, a méhtonus (és ezzel együtt az öszszehúzódás is) 50%-kal csökkent olyan infúzió mennyiségnél, amely az Oxitocin infúziónak 7— 12-szerese. Az Oxitocin teljes inhibiciója 15:1 — 20:1 arányú mennyiségi arányánál következett be. Egyszeri alkalmazás után az analóg eltűnését követően az oxitocinhatás teljes mértékben helyreáll (tachyphylaxia nem lép fel). A találmány szerinti vegyület az anyaméh spontán működését nem befolyásolja. A méhre gyakorolt inhibiciós hatás következtében az Na-acetil-2-0-metiltirozin-oxitocinnak a szülészetben fontos alkalmazási lehetősége van, kiváltképpen az abortus imminens, a partus praematurus imminens, a tetania uteri és a szülés közbeni túl erős méhműködés kezelésénél. A találmány szerinti eljárás kiviteli módját közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: 100 mg 2-0-metiltirozin-oxitocin 0,5 ml dimetilformamiddal készített oldatához 65,1 mg 5-5 -klór-kinolin-8-acetátot adunk. A reakcióelegyet 60 órán át 0 C°-on állni hagyjuk, majd 25 ml éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. A hozam: 89,4 mg. Ezt a terméket 2 ml piridin-acetát pufferban feloldjuk, CM-Sepha-10 dex-oszlopon szűrjük (szemcsenagyság 100— 270 mesh, oszlop mérete 1,4X40 cm, 4,5 mekv./g), a szűrletet ismét piridin-acetát pufferral (pH = = 6,5) elegyítjük és 15 ml/óra áthaladási sebességgel újra szűrjük. Az acilezett pepiidet tartal-15 mázó eluátumot betöményítjük és fagyasztva szublimáljuk. 61 mg anyagot kapunk, amelyet 2 ml 1 mólos ecetsavban feloldunk és Bio-Gel P4 oszlopon (1,2X104 cm) 1 mólos ecetsavval 8 ml/óra áthaladási sebességgel szűrünk. A mo-20 nomér acilezett pektideket tartalmazó frakciókat (1,8—1,8 ml) egyesítjük, kis térfogatra betöményítjük és fagyasztva szublimáljuk. 57 mg (57%) terméket kapunk. [JU]D25 = 87,0° (c = = 0,316, 1 mólos ecetsavban). A termék elektro-25 forézissel és kromatográfiásan tiszta, R/ = 0,50 (n-butanol-ecetsav-víz, 4:1:1), 0,72 (n- butanol-piridin-ecetsav-víz, 15:10:3:6), 0,29 (szék. butanol —90'%-os hangyasav-víz, 75:13,5:11,5). Az aminosav-analízis (20 órás hidrolízis 6 mólos 30 HCl-el) a következő Összetételt mutatja: Asp :1,00, Glu:l,00, Pro:0,92, Gly:0,96, Cys:l,l, Ileu:0,92, Leu:l,00, Tyr:0,68, Tyr (CH3):0,28. Az elementáranalizisra kerülő mintát 24 órán 35 át 1 Hgmm nyomáson P2O5 felett szárítottuk, a szárítás után a súlycsökkenés 6,20% volt. Összegképlet: C64 H7oN 12 Oi3S2• 3H 2 0 (117,2) 40 Számított: C = 49,45% H = 6,68%, N =15,05% Talált: C = 49,50%, H = 6,96%, N =14,43%. 45 2. példa: 20 mg 2-0-metiltirozin-oxitocin 0,1 ml dimetilformamiddal készült oldatához 6,0 mg ecetsavanhidridet adunk. A reakcióelegyet 60 órán át 50 0 C°-on állni hagyjuk, majd 10 ml éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük és szárítjuk. A terméket az 1. példában leírt módon tisztítjuk. A hozam 10 mg (.50%). A termék elektroforézissel és kromatográfiásan az 1. példa szerinti ter-55 mékkel azonos. Az aminosav analízis eredménye: 60 Asp: 1,09, Glu: 1,05, Pro: 1,05, Gly: 1,00, Cys: 0,92, Ileu: 0,95, Leu: 1,01, Tyr: 0,65, Tyr(CH3): 0,23. 65 * Elemzési adatok az összegképlet alapján: 2
