160758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klinikai célokra alkalmas, infektálható inzulinkészítmény előállítására

160758 17 18 aszeptikus körülmények között 0,1 g metil-p-hidroxibenzoátot tartalmazó 60 ml steril vizes oldattal elegyítjük. Az elegyhez végül 136 mg nátriumacetátot, 0,7 g nátriumkloridot és 10 mg nátriumhidroxidot tartalmazó 20 ml steril oldatot adunk, A kapott elegy pH-ja 7,3. Az elegyet aszeptikus körülmények között sterilizált ampullákba töltjük. 10. példa: 40 NE/ml koncentrációjú, protamin-cink-inzulin injekció 1,6 g, az 1. példa szerint előállított tisztított inzulint 75 ml 0,03 N sósavoldatban oldunk. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk, és a szűrletet állandó keverés közben, aszeptikus körülmények között 16 g glicerint, 85 mg cinkkel ekvivalens cinkkloridot és 1 g metil-p-hidroxibenzoátot tartalmazó, 800 ml steril oldattal elegyítjük. A kapott oldathoz 340 mg protaminszulfátot tartalmazó, 25 ml steril 0,08 N sósa volda tot, és 1,36 g nátriumacetátot tartalmazó 100 ml steril 0,058 N nátriumhidroxid-oldatot adunk. Az elegy pH-ja kb. 7,2. Az elegyet aszeptikus körülmények között steril ampullákba töltjük. 11. példa: 40 NE/ml koncentrációjú, kétfzázisú inzulin-injekció A fenti gyógyászati inzulin-készítmény előállításához acetát-só pufferből átkristályosított tiszta inzulint használunk fel. 1,6 g, a 8. példa szerint előállított tiszta marha-inzulint 1,1 mg cinkkel ekvivalens cinkkloridot tartalmazó 75 ml 0,04 N sósavoldatban oldunk. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk, és a szűrletet állandó keverés közben, aszeptikus körülmények között 1,36 g nátriumacetátot, 7 g nátriumkloridot, és az elegynek 5,4—5,5-ös pH-értéket biztosító menynyiségű nátriumhidroxidot tartalmazó 25 ml steril oldattal elegyítjük. Az elegyet addig keverjük, amíg a kivált inzulin romboéderes kristályokká alakul (kb. 20 óra). A szuszpenziót ezután aszeptikus körülmények között 1 g metil-p-hidroxi-benzoátot tartalmazó 800 ml steril vizes oldattal elegyítjük, és az elegyet kb. 7-es pH-t biztosító mennyiségű nátriumhidroxidot tartalmazó 100 ml oldattal hígítjuk. Az így kapott készítményhez annyi 1,6 mg/ml koncentrációjú, steril, semleges, tiszta inzulinoldatot adunk, hogy az inzulin összmennyiségének negyedrésze oldott formában legyen jelen. A szuszpenziót aszeptikus körülmények között steril ampullákba töltjük. A tiszta inzulin steril oldatát a következőképpen állítjuk elő: 0,4 g, a 8. példa szerint előállított tiszta sertés-inzulint 0,25 mg cinkkel ekvivalens mennyiségű cinkkloridot tartalmazó, 25 ml 0,02 N sósavoldatban oldunk. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk, és a szűrletet aszeptikus körülmények között 0,25 g metil-p-hidroxibenzoátot tartalmazó 200 ml steril vizes oldattal és 5 0,34 g nátriumacetátot, 1,75 g nátriumkloridot és a végső oldatnak kb. 7-es pH-t biztosító mennyiségű nátriumhidroxidot tartalmazó, 25 ml steril oldattal hígítjuk. 10 15 60 12. példa: 40 NE/ml koncentrációjú inzulin-cink szuszpenzió Az első lépésben a készítmény kristályos frakcióját állítjuk elő. 1,6 g, a 3. példa szerint előállított tiszta inzulint 10 mg cinkkel ekvivalens mennyiségű cinkkloridot tartalmazó 75 20 ml 0,02 N sósavoldatban oldunk. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk, és a szűrletet aszeptikus körülmények között, keverés közben 1,36 g nátriumacetátot, 7 g nátriumkloridot, és az elegynek 5,4—5,5-ös pH-t biztosító mennyiségű nát-25 riumhidroxidot tartalmazó, 25 ml steril oldattal elegyítjük. Az elegyet addig keverjük, amíg a kivált tiszta inzulin romboéderes kristályokká alakul (kb. 20 óra). A szuszpenziót ezután aszeptikus körülmények között, állandó keve-30 rés közben 70 mg cinkkel ekvivalens mennyiségű cinkkloridot, 1 g metil-p-hidroxi-benzoátot, és a végső elegynek kb. 7,3-as pH-t biztosító mennyiségű nátriumhidroxidot tartalmazó, 900 ml steril oldathoz adjuk. Az amorf frakciót a következőképpen állítjuk elő: 1,6 g, az 5. példa szerint előállított tiszta inzulint 10 mg cinkkel ekvivalens menynyiségű cinkkloridot tartalmazó, 100 ml 0,02 N 40 sósavoldatban oldunk, az oldatot szűréssel sterlizáljuk, és a szűrletet aszeptikus körülmények között 70 mg cinkkel ekvivalens menynyisésű cinkkloridot, és 1 g metil-p-hidroxibenzoátot tartalmazó, 800 ml steril oldattal 4g hígítjuk. Az elegyhez ezután 1,36 g nátriumacetátot, 7 g nátriumkloridot és a végső elegynek kb. 7,3-as pH-t biztosító mennyiségű nátriumhidroxidot tartalmazó, 100 ml steril oldatot adunk. A beadagolást aszeptikus körülmények 50 között, állandó keverés közben végezzük. Az inzulin-cink szuszpenziót úgy állítjuk elő, hogy aszeptikus körülmények között 7 térfogatrész kristályos szuszpenziót 3 térfogatrész amorf szuszoenzióval elegyítünk. Az elegvet aszeotikus körülmények között steril ampullákba töltjük. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás klinikai felhasználásra alkalmas injektálható inzulin-készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagként felhasználandó inzulint, célszerűen gél-szűrés és 65 oszlop-kromatográfiai tisztítás útján, mentésit-9