160758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klinikai célokra alkalmas, infektálható inzulinkészítmény előállítására

160758 9 10 *s= 5,5 értéken) elkülönítjük, és a csapadékot eentrifugálással elválasztjuk. • A tisztítási lépések sarán tisztított inzulint tartalmazó oldatfrakciókat kapunk. Az oldatokból az inzulint szokásos módszerekkel, pl. be-* pártással, kisózással, vagy cinkionok jelenlétében végrehajtott kicsapással különítjük el. Az inzulint kívánt esetben kristályosíthatjuk, és szokásos módon injektálható inzulinkészítményekké alakíthatjuk. A találmány szerinti eljárás egy különleges foganatosítási módja azon a felismerésünkön alapul, hogy egy lépésben is nyerhetünk az említett különleges minőségi feltételeknek megfelelő tiszta inzulint, ha az inzulint anioncserélő gyantát, előnyösen erősen bázisos anioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon kromatografáljuk és az eluálást víztartalmú, vízzel elegyedő szerves oldószerrel végezzük. Az eljárás e foganatosítási módja esetében a kereskedelmi minőségű inzulin vagy a legalább 10 súly% inzulint tartalmazó nyers inzulin oszlop-kromatográfiás tisztítására ioncserélő-oszlopot és eluálószerként víztartalmú, vízzel elegyedő szerves oldószert, előnyösen alifás alkoholt alkalmazunk, azzal jellemezve, hogy az oszlop-kromatográfiás tisztítást bázisos, előnyösen erősen bázisos anionic 15 20 25 cserélő oszlopon végezzük és az eluálási frakciók közül azokat az inzulintartalom-csúcsértéknek megfelelő frakciókat gyűjtjük össze, amelyek a poliakrilamid-gél-elektroforézissel végzett analízis során már egységes anyagúnak mutatkoznak és az így kapott tiszta inzulint alakítjuk injektálható inzulin-készítménnyé. Igen meglepő, hogy a fenti módon, tehát anioncserélő eljárásnak a találmány szerinti alkalmazásával egyetlen lépésben is elérhetjük a fenti meghatározásnak megfelelő különleges tisztasági fokot; ez annál váratlanabb volt, mert ismeretes, hogy az ismert kationcserélős oszlopkromatográfiával és etanolos eluálással nem kapunk a követelményeknek megfelelő tisztasági fokú inzulint. A gél-szűréses tisztítás céljaira alkalmas anyagokat, valamint a találmány szerinti eljárásban az oszlop-kromatográfiás tisztítás céljaira használható ioncserélő gyantákat az alábbi táblázatban ismertetjük. Megjegyzendő azonban, hogy a táblázatban említett kationcserélő gyanták csak oly esetekben szolgálhatnak ioncserélő-oszlopkromatográfiás tisztítási műveletek céljaira, ha az ilyen kromatográfiás műveletek a gél-szűréses tisztítási lépéssel kombináltan alkalmazzuk, előnyösen azonban anioncserélő gyantákkal dolgozunk. Anyag Mátrix Szintetikus Poliakril- Poli- Poliakrilamid sztirol sav Természetes alapú Keresztkötéses Cellulóz Alginsav dextrán Gélszűrő anyagok Bio-Gel P—10 Bio-Gel P—30 Sephadex G—50 Sephadex G—75 Anioncserélők Erősen bázikus csoportok Dovew 1 QAE— Sephadex Gyengén bázikus csoportok Bio-Gel DM DEAE— Sephadex DEAE cellulóz Kationeserélők Erősen savas csoportok Dovew 50 W SE— Sephadex Foszfort* lezett ceűulőz Gyengén savas csoportok Bio-Gel CM Amberlíte CG 50 CM— Sephadex CM— cellulóz Alginsav Az alábbi példák közül az 1. és 2. példa együttesen, továbbá a 3—8. példa az inzulinnak a találmány szerinti követelményeket kielégítő mértékben történő tisztítását ismerteti, míg a további példák az injektálható készítmények előállítási módját szemléltetik közelebbről. 60 *• Példa: 5 kg jó minőségű Sephadex G 50-t (a Pharmacia, Uppsala svédországi cég gyártmánya) 1 M ecetsav-oldatban duzzasztunk, és a fmo-65 mabb részecskéket dekantáJással eltávolítjuk. s