160678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16884 jelzésű antibiotikum előállítására
19 gyantát a szűrőn vízzel mossuk, és a szűrleteket egyesítjük. Az egyesített szűrlet pH-ja 2,7. A szűrletet vákuumban kb. 1 ml-re pároljuk be, 4 ml metanolt adunk hozzá, és a savat 40 ml aceton hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot lecentrifugáljuk, és vákuumban szárítva 35 mg sav formájú A168S4 antibiotikum keletkezik. A sav pK'a-értékei 66% dimetüfoonamidban, 4,5 kezdeti pH-ai titrálva: 3,5, 5,2 és 10,3. 11. példa: Az A16884 antibiotifcam dinátriumsójának előállítása 180 mg A16884 antibiotikum monoammóniumsót 2 ml vísfoen oldunk, és a pH-4 1 N nátriumhidroxiddal lß-re állítjuk be. Az oldatot vákuumban kistérfogatra pároljuk be, 4 ml metanolt adunk hozzá, és 40 ml acetont hozzáadva kicsapjuk Ä dinátriumsót. A .sót lecentrifugáljuk és vákuumban szárítjuk. A só pK'aértékei 3,9, 5,2 és 10,5, 66% dimetálformamidban, 10,4 kezdeti pH-nál titrálva; atomabszorpciós analízis 6% nátriumot mutat. 12. példa: Az A 16884 antibiotikum hidisoiklorid «leállítása A16884 monoammóniiumsót (200 mg-ot) 2 ml vízben oldunk, és a pH-t 1 N sósavval 2-re állítjuk be. A reakcióelegyet ezután 5,0 ml metanollal hígítjuk, és 50 ml acetont hozzáadva kicsapjuk a kívánt A 16884 antibiotikum hidrokloridot. A csapadékot lecentrifugáljuk, acetonnal mossuk, és vákuumban szárítjuk. Az analízis 5,74% klórt mutat, a 66% dimetilformamidban 5,0 kezdeti pEkértéken végzett elektrometrikus titrálás 3,9, 5,2 és 10,4 pK'aértékeket ad. 13. példa: Nyers Al 6884 antibiotikum izolálása mononatriumsóként Kb. 60 liter, a lenti 7. példában leírt módon nyert fermentlevet Hyflo-Superoellel szűrünk. A szűrletet 9,6X150 cm méretű, -szénnel (Pittsburgh Cal. 12X40) töltött oszlopon engedjük át. Az oszlopot addig mossuk vízzel, míg a lecsepegőoldat színtelen lesz, majd az aktivitást az oszlopon 50%-os vizes acetont átengedve távolítjuk el. Az aktivitásokat tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban desztilláljuk az acetont, és a maradék oldatot egy 5,9X104 cmes, IRA-gyantával (acetátciklusú) töltött oszlopra visszük fel. Az oszlopot addig mossuk vízzel, míg a lecsepegő oldat tiszta és színtelen lesz, és az aktivitást 0,1 M nátriumacetátoldattal mosva távolítjuk el. Az aktív frakciókat egye-96?8 20 sítjük és egy 4,3X72 cm-es Pittsburgh Cal. (12X40) szénnel töltött oszlopon engedjük át. Az oszlopot hatszoros oszloptérfogat vízzel mossuk, és az aktivitást 3QÍ%-QS vizes acetonnal § eluáljuk. Az aktív frakciókat egyesítjük, vákuumban eltávolítjuk az acetont, és a .maradékot liofilizáljuk. Termelés 20—30 g. Áz analízis 2,5%, nátriumot mutat. ,0 Az A16884 antibiotikumot monoammóniumsójaként növényekre patogén baktériumok gátlására vizsgáltuk. A vizsgálat során az A16884 monoammóniumsót vizes spray alakra dolgoztuk fel, mely a készítmény súlyára vonatkoz-15 tátva 400 ppm antibiotikumot tartalmaz. 30 napos paradicsompalántákat használtunk a méréshez, minden edényben 2 palántát. Az egyik edényben levő növényeket a fentiekben leírt oldattal kezeltük, levegőn szárítottuk, majd 2fi aktívan növekvő Pseudomonas solanacearumot tartalmazó szuszpenzióval oltottuk be őket. Kontrollként a másik edényben ültetett növényeket ugyanilyen összetételű kezelőoldattal permetezzük be, amely azonban nem tartalmaz antibiotikumot. A kontarollmövényeket ugyanügy utólag inokuláljuk. Az összes növényt 24 . óráig nedves kamrában, majd innen kivéve 7 napon át jó tenyészkörülmények között tartjuk. A 7 napos periódus után a növényeken megvizsgáljuk a fertőzések jelenlétét és fokát. Az A16834 antibiotikummal kezelt növények teljesen mentesek a Pseudomonas solanaoearum fertőzés tüneteitől, míg a kontpollnövényeken a Pseudomonas solanacearum fertőzés teljesen kiterjedt. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás A16884 antibiotikum vagy sói előállítására, mely antibiotikum monoammóniumsója fehér, amorf anyag, mely 180 °C körüli hőmérsékleten bomlik, vízben igen jól, rövidszénláncú alifás alkoholokban gyengén, acetonitrilben pedig egyáltalán nem oldódik, és dimetilszulfoxidban oldható; amfoter jellegű és négy titrálható csoporttal rendelkezik, melyek pK'a-értékei: pK'ai = 3,9, pK'a2=5,3, pK'a3 = = 9,2 és pK'a4 = 10,5, 66% dimetilformamidban, 5,8 kezdeti pH-értéken titrálva átlagos molekulasúlya titrálási adatokból számítva kib. 435; hozzávetőleges összetétele 44,01% szén, 5,73% hidrogén, 10,65% nitrogén, 31,27% oxigén, 6,86 kén; fajlagos optikai forgatóképessége [«]25 D = 55 = +140,9° (C = 1% súly/tf% vízben); ásványiolajban infravörös abszorpciós spektruma a következő hullámhosszaknál ad jellegzetes sávokat (mikronban kifejezve): 3,18 (széles sáv), 5,66, 6,26, 6,57, 6,89, 7,15, 7,28, 7,40, 7,73, 8,00, 60 8,14, 8,79, 9,24, 9,65, 9,79 és 10,40; pozitív reakciót ad ninhidrinnel Pan, Dutcher-féle vizsgálattal, Benedict, Molisdh, jód és danziklorid reagenseikkel, negatívat pedig Fehling vas-III$5 -klorid, biuret és Sakaguchi reagensekkel, az-10
