160622. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz stabilizálására
MAQTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. H. 12. (BA—2172) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbségei: 196». V. 29. (P 17 67 617.4); 1968. XI. 07. (P 18 07 447.0) Közzététel napja: 1971. XII. 27. Megjelent: 1973. IX. 28. 160622 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02; C 07 b 21/00 ÍJ ' i *, .,»' Feltalálók: Dr. Wagner Otto vegyész, Wuppertal-Elberfeld, Dr. Bauer Klaus vegyész, Wuppertal-Elberfeld, Dr. Kaufmann Wilfried biokémikus, Wuppertal-Vohwinkel, Dr. Rauenbusch Erich vegyész, Wuppertal-Elberfeld, Dr. Árens Alfred vegyész, Wuppertal-Elberfeld, Dr. Irion Eckart vegyész, Wuppertal-Elberfeld, . Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Farbenfabriken Bayer AG. cég, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás L-aszparagináz stabilizálására Az L-aszparagináz enzim ismert anyag (L-aszparagin-amidohidroláz E.C.3.5.1.1); E. coli sejtekből extrakcióval állítható elő (vö. H. A. Campbell, L. T. Mashburn, E. A. Boyse, L. J. Old, Biochemistry 6 [1967], 721—730; itt további irodalmi hivatkozások találhatók). Az L-aszparagináznak egy idő óta gyógyászati anyagként van jelentősége olyan rosszindulatú daganatok ellen alkalmazva, amelyek növekedéséhez L-aszparagin szükséges. Az L-aszparagináz az enzim,-kémiában szokásos módszerekkel tisztítható, pl. oszlop-kromatográfiás eljárással, ammóniumszulfáttal vagy közömbös oldószerekkel történő frakcionált kicsapással. Nehézségeket okoz azonban az L-aszparagináz enzim olyan mértékű tisztítása, hogy kristályos formában legyen kinyerhető. Ez a nehézség onnan adódik, hogy az L-aszparagináz a természetben jelentős mennyiségű kísérő proteinnel együtt fordul elő, amelytől nehéz elválasztani. A 726113 sz. belga szabadalmi leírás szerinti eljárás azon a felismerésen alapszik, hogy az L-aszparagináz megszabadítható ezen inaktív kísérőproteinek bizonyos részétől, ha a nyers L-aszparagináz oldatot 15 perere 59,5 °C hőmérsékletűre felmelegítik. Ekkor a kísérő proteinek részben denaturálódnak, az enzim viszont aktívabb formában az oldatban 10 marad. Ez az eljárás bonyolult és preparatív nagyságrendben végzett munka esetében kevésbé alkalmas, mert a kívánt eredmény eléréséhez mind az időtrabló, mind a hőmérsékletet igen pontosan be kell tartani. Különösen célszerűnek bizonyult egy olyan eljárás az enzim tisztítására, amely szerint az L-aszparaginázt polietilénglikollal frakcionálják. Ezen eljárás során karbamid adalék alkalmazása és az enzim izoelektromos pontjának beállítása különösen tiszta preparátum előállítását teszi lehetővé. 20 A fehérje kémiából ismeretes, hogy az enzi-15 mekkel való munka során több fajta denaturálás. jöhet számításba: pl. a hővel történő denaturálás, szélsőséges pH-érték beállításával történő denaturálás, és a felületi denaturálás [vö. J. Biol. Chem. 118 (1937), 163—175]. Hő hatására általában akkor következik be denaturálódás, ha a fehérjét 40 °C feletti hőmérsékletre melegítjük. Az egyes fehérjéknek, eltérő stabilitású szerkezetük következtében, különféle „határ"-hőmérsékletük van, ahol a denaturálódás bekövetkezik. Hasonló módon megfelelő denaturálódás érhető el túl nagy vagy túlságosan kis pH-érték beállításával is. A felületi denaturálódás abban áll, hogy egy felülettel való kölcsönhatás vagy a fázishatár felületek növe-30 lése egyaránt a fehérjék hidrogén hídjainak 25 1606122
