160598. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású vegyületek előállítására

160598 13 14 sárga sávja tűnik elő. A 4. példa szerint készült 2 g 66—40 antibiotikum-szulfátot feloldunk kb. 3 ml felső oldószerfázisban, és némi cellulózporral keverve és vákuumban megszárítva felvisszük a cellulóz-oszlop tetejére. Az alsó fázisát az oldatrendszernek átbocsátjuk az oszlopon percenként 1 ml ütemben, 5 ml-es frakciókat gyűjtve 15 percenként. Mindegyik frakcióból alikvot mennyiséget szűrőpapírra viszünk, és ninhidrinnel megvizsgáljuk az antibiotikum jelenlétére. Az antibiotikumot tartalmazó frakciókat papírkromatografálva kitűnik, hogy a kívánt anyag a 121. és 190. frakciók között helyezkedik el. A 121—190. frakciókat egyesítjük, szárazra bepároljuk, vízben újra oldjuk, és átbocsátjuk hidroxilfázisú IRA 401S anionkicserélő gyantán. Az eluátumot beállítjuk kénsawal 4,5 pH-ra, aktívszénnel kezeljük, szűrjük és kis térfogatra koncentráljuk. A koncentrátumot fölös mennyiségű metanolhoz adjuk, és a képződő fehér csapadékot szűréssel elválasztjuk. A csapadékot vízben oldjuk, és hidroxilfázis'ban levő IRA 401S gyanta-oszlopon bocsátjuk át. Az átfolyó folyadékot összegyűjtjük, bepároljuk, és liofilizálva kb. 300 mg 66—40 antibiotikum bázist kapunk kb. 1000 /ig/mg titerrel. 6. példa: 66—40 antibiOitikum-Jhidroklorid előállítása A 2. példa szerint kapott 104,7 mg 66—40 antibiotikum bázist 4 ml vízben oldunk, és az oldat pH-ját sósavval 4,5 értékre állítjuk be. Az oldatot szárazra bepároljuk, és metanolban ismét feloldjuk. Az oldathoz fölös acetont adunk, és a kapott csapadékot szűrőn elválasztva 130 mg 66—40 antibiotikum-hidrokloridot nyerünk 753 /*g/mg titerrel. 7. példa: Kristályos 66—40 antibiotikum-monohidrát előállítása 26 cm magas és 2,5 cm átmérőjű kovasavgél kromatográfiai oszlopot készítünk, kifejlesztő-10 16 20 25 30 35 40 45 eiuensként 1:2:1 térfogatarányú izopropanol-kloroform-ammóniumhidroxid oldószerkeverék alsó (szerves) fázisát alkalmazva, 1,0 g 66—40 antibiotikum bázist feloldunk 5,0 ml oldószerkeverékben. Az antibiotikum oldatot felvisszük a kovasavgélre, és kromatografáljuk. 5,0 ml-es frakciókat gyűjtünk, és a kívánt frakciók helyét kovasavgél lemezen végzett vékonyréteges kromatografálással állapítjuk meg. A megfelelő, 44—7)8. frakciókat egyesítve és vákuumban bepárolva halványsárga szirupot kapunk, ez etanollal azeotróp desztillálva halványsárga rozetták alakjában kristályosodik íci. Az így kapott termék az antibiotikum kb. 185—190 °C-on olvadó monohidrátja. A hozam kb. 650 mg. A 66—40 antibiotikum farmakológiailag elfogadható savaddiciós sói szabad állapotban vagy szolvátként széles antibakteriális spektrumú vegyületek. Gátolják a Gram-pozitíiv és Gram-negatív baktériumok növekedését, és így magukban vagy más antibiotikumokkal együtt felhasználhatók baktériumok ellen különféle környezetekben. Alkalmasak például Staphylococcus aureus-szal és az új vegyületek által gátolt más baktériumokkal fertőzött laboratóriumi üvegeszközök, fogorvosi és orvosi berendezés fertőtlenítésére. Különösen jól használhatók Gram-negatív mikroorganizmusok okozta fertőzések leküzdésére. Mint a 3 091 572 számú amerikai szabadalom leírásából kitűnik, a Micromonospóra nem egyik törzsével már korábban előállították a gentamicin széles hatásspektrumú antibiotikumot. A gentamicin a 66—40 antibiotikumhoz hasonlóan mind a Gram-pozitív, mind a Gram-negatív baktériumok ellen hatásos, és így hatásspektruma meghaladja olyan jól ismert antibiotikumokét, mint az eritromicin, szpiramicin, oleandomicin, tilozin, penicillin, foadtracin és linkomicin. Mint a H táblázatból Mtűnik, a 66— 40 antibiotikum még a gentamicinnél is hatásosabb számos íontos kórokozóval szemben. A 66—40 antibiotikum akut toxicitását szokványos módon határoztuk meg 18—20 g-os egereken. A J táblázatban (közölt toxicitási adatok át vannak számítva a szabad bázisra. H táblázat Szubkután beadott 66—40 antibiotikum és gentamicin hatásossága egerek Gram-negatív fertőzésével szemben A: az antibiotikumot egyszerre adtuk be a fertőzés után egy órával B: az antibiotikumot két részletben adtuk be a fertőzés után fél, illetve négy órával 66—40 = 66—40 antibiotikum, Gent, — gentamicin Mikroorganizmus 66—40 PD50, mg/kg Gent. 66—40 B Gent. Gent. PD50 66—40 PD50 A B Escherichia coli Sc. Escherichia coli 1 1,7 1,5 3,2 1,5 1,4 0,2 1,5 0,5 1,9 1,0 1,1 2,5 1