160586. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2 béta 16 alfa-dihidroxi-kortizon, -hidrokortizon és észter-származékaik ketáljainak előállítására
160586 rel beoltottunk nyolc 250 ml-es Erlenmeyer-lomfoiklban 50—50 ml következő összetételű steril táptalajt (B): kukoricalekvár ammóniumdihidrogénfoszfát élesztőkivonat glukóz kalciumkaíbonát desztillált vízzel kiegészítve 3 g 2,5 g ilO g 2,5 g 1 literre 25°-on állandó rázás köziben (percenként 280 fordulat, 5 cm löket) végzett 24 órai inkubálás után 10 tf% fermentlevet átvittünk húsz db 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50—50 ml frissen sterilizált B táptalajba. Ezután hozzáadtuk a szteroidot (300 Afg/ml), minden lombikba 0,25 ml 60 mg/ml koncentrációjú steril N,iN-dimetilfarmamidos löa-íhidroxikortexolon-16,17-acetonid oldatot öntve, összesen 300 ragot fermentáltunk. A fent leírttal azonos körülmények között végzett tob. 26 órai inkubálás után a lombikok tartalmát egyesítettük, és a fermentlevet Seitzféle derítőszűrőn átszűrtük. A lombikokat, a micéliumot és a szűrőt több 100 ml-es adag meleg vízzel mostuk. Az egyesített szűredék és mosófolyadékok térfogata 1200 ml volt. Ezeket 3 ízben 400—400 ml kloroformmal extraháltuk, a kivonatokat egyesítettük, vízzel mostuk, és csökkentett nyomás alatt heipároltuk. A maradékot aceton és hexán elegyéből kikristályosítva 16!<nbidroxihidrokortizon^li6,17-acetonidot kaptunk 205—206° olvadásponttal. Több fermentáció anyalúgját összegyűjtöttük, és HF254 kovasavgél vékonyrétegen kromatografáltuk, 1 :1 térfogatarányú etilacetát-kloroform elegyet használva kifejlesztő oldatként. Ultraibolya fényen több sáv válik láthatóvá. A legkevésbé poláris sávot elválasztottuk, 20% metanolt tartalmazó etilacetáttal eluáltuk, és az oldószer elpárologtatása után li&a-^hidroxihidrokortizon-16,17-acetonidot kaptunk, T^TM** 9,41 (e, 18—OH3 ), 8,59 (e, 19—CH 3 ), 8,81 (e, ß^CH 3, az acetonidból), 8,48 (e, a—CH3, az acetonidból), 4,94 (d, J —4,5 cps, 16j0—H), 4,28 (e, 4—H) (e, = erős, d = dupla). A legpolárisabb sáviból hasonló eluálási, szűrési és foepárlási művelettel 2^,16ia-idihidroxihidrokortizon-16,!17Hacetonidot kaptunk. 2. példa: 2ß,l 6icc-Dihidroxihidrokortizon^l6,l 7-alcetonid-2,21-diaoetát 10O mg 2j5,!l6ia-'dihidroxihidrokortizon-16,17--acetonidnak 3 ml száraz piridinnel és 1 ml eeetsavanhidriddel készült oldatát 16 óra hoszszat szolbahőmérsékleten hagytuk állni, majd 10 15 20 háltuk. A kloroformos oldatot sorban 2 n sósavval, 5%-os nátriumhidrogénkairbonát-oldattal és vízzel mostuk, és csökkentett nyomás alatt bepároltuk. A maradékot HF254 kovasavgél lemezen kromatografáltuk, 1 :4 térfogatarányú etilacetát-kloroform elegyet alkalmazva kifejlesztő oldószerként. Az ultraibolya fényben látható Rf k'b. 0,4 sávot 20% metanolt tartalmazó etilacetáttal eluáltuk, és a maradékot aceton és hexán elegyéből kikristályosítva 84 g 2'/?,16a-dihidroxiihidrokortizoin-!lo,17-acetonid-2,21-diacetátot kaptunk 22:6—^228° olvadásponttal; [G]25D =+9,4° (kloroformban). ,aUt 2""* 243 max m» 2,94, 5,72, 5,73, 5,98, 6,14 /<, ^CH3 ), 8,77 (e, \ß—CH3, az ace(e, 14,040), i^u301 v ' ' •" max *SSi9 > 09 fe 18 -tonidlból), 8,61, 8,51 (e, 19—CH3 és a—CH 3 az acetonidból), 7,82 (e, 21^0Ac és 21—OAc) 5,0, 5,10 (ABq, 21—CH2 ) 5,41 (k, Uta—H), 4,63 (q, J=5, 13,5 cps, 2a—H), 4,27 (e, 4—H) (k = közepes). Összetétel: C28 H 3 809 (518,58): 25 számított: C 64,85, H 7,30% talált: C 64,54, H 7,50% 30 35 40 45 50 55 60 3. példa: 2/ ?,16ia-Diihidroxikortizon-16,íl7-acetonid-i2,21--diacetát 300 mg 2!/?,l&aHdiihidroxmMrokortÍ2on-16,17--acetonidnak 20 ml analitikailag tiszta acetonnal készült oldatához addig csepegtettünk 9 :1 térfogatarányú aceton-víz elegyben ml-enként 20 mg krómtrioxidot és 32 mg kénsavat tartalmazó oldatot, amíg az oldat színe többé nem halványult. A fölös oxidálószert néhány csepp metanollal elbontottuk. Ezután a keveréket lassan vízzel hígítottuk, mire kristályok váltak ki. Ezeket szűrőre vittük, vízzel mostuk, és megszárítva 274 mg 2:/?,16a-dilndroxikortizo,nMl6,17-acetcnid-í2,21-diacetátot kaptunk. 190—402° olvadásponttal; [a]25 D =+57° (kloroformiban). l^x 238 ny* (s, 14,300), l^f 5,71, 5,78, 5,88, 5,92, 6,16 f*. T^* 9,35 (e, 18-€H3 ), 8,73 (e, '/?—CH 3 , az acetonidból), 8,60, 8,42 (e, 19—CH3 és te—CH 3 , az acetonidból), 7,82 i(e, 2-^QAc, 21—OAc), 4,94, 5.35 (ABq, J = 17,7 cps, 21—CH2 ), 4,95 (k, lßß—H), 4,72. (q, J = 5,10 cps, 2a—H), 4,19 (e, 4—iH). Összetétel: 028^09 (516,57): számított: C 65,09, H 7,02% talált: C 65,50, H 7,28% Szabadalmi igénypont: Eljárás 2'/ #,16«Jdih'idroxikortizon és 2j5,16a-dijeges vízzel hígítottuk, és kloroformmal extra- gg hidroxihidrokortizon és észterszármazékaik I ál-3
