160416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az YL 704 antibiotikumok előállítására
15 160416 16 lőzve és perceníkin|t 260 fordulattal keverve a ferment« tartalmát, miközben a belső nyomást 0,5 kg/cmi2-en tartottuk. A közeg pH-értéke 20 órai fermentáció alatt 6,3-na csökken. 30 órai .fermentáció után a pH-érték fokozatosan növekedni kezd és kb. 45 óra múlva eléri a 7,8 értéket. Aiz YL 704 antibiotikum kb. 24 órai fermentáció után kezd felgyülemleni a fermentációs lében A maximális antibiotikum-tartalmat — 200—400 meg/ml — kb. 45 órai fermentáció után érjük el. 2. ipélda: Éxtrakció és kinyerés aktívszénnel Az 1. példában leirt módon kapott férmentlevét S% diatomaföld rétegen keresztül leszűrjük; 100 liter szűrletet kapunk, amelynek antibiotdkum-tartataa 250 meg/iml. A szűrlet pH-ériékét vizes aimmániumhidroxidoldattal 8,0-ra állítjuk. Ezután 0,6 kg aktívsizenet és 0,5 kg diatamaföildet adunk a szűrlethez és 30 percig keverjük. E művelet során az YL 704 antibiotickum-elegy teljesen adszorbeálódik az aktívszénen. Az aktívszenet azután szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk, majd 25—25 liter 80%-os vizes aoetonnal vagy metanollal (melynek pH-értékét előzetesen ä.Onria állítottuk) kétszer exfcraháljuk. A kivonat pH-értékét 7,0-ra állítjuk, majd csökkentett nyomás alatt 10 liter térfiogaitra pároljuk be. Az így kapott oldat antibiiatikunir tartalma 2400 meg/ml; a hozam meghaladja az elméleti mennyiség 95%Hát. 3. példa: Oldószeres éxtrakció és betöményítés 120 liter fermentlevet, amelyet az 1. példában leírt1 eljárással kaptunk 1 , 5% diait'Oimiaföld ' segítségével leszűrünk. A szűrlet pH-értékét 7,0 és 8,0 közöttire állítjuk, majd 7 kg nátriumkloridot oldunk a szűrlatben. Ezután 40—40 liter etilaoetáttal kétezer extraháljuk. A kivonatot csökkentett nyomás alatt 10 liter térfogatra pároljuk be; az így, kapott koncentrált oldat antibiotikum-aktivitása 11218 meg/ml. Az oldatot 1—1 liter savas vízzel (pH = 2,0) kétszer extraháljuk. A vizes kivonat pH-értékét 8,0-nra állítjuk ós 1-—1 liter benzollal kétszer extraháljuk. Az egyesített benzoics kivonatot bepároljuk szárazra, csökkentett nyomás alatt. Ily módon 15,6 g nyers kristályos terméket kapunk, ezt 100 ml benzolban oldjuk. Az oldatot egy 15,6 g alumíniúmoxidöt (benzollal megnedvesítve) tartalmazó oszlopra öntjük. Az oszlopot azután etilacetáittal eluáljuk és az antibiotikus aktivitást mutató frakciókat egyesítjük. Az egyesített eluátumot bepároljuk szárazra; ily módon 14 g YL 704 antibiotikum-elegyet kapunk száraz por alakjában. 4. példa: Az YL 704 antibioitikuim-ielegy kristályosítása 5 A3, példában leírt eljárással kapott 4,0 g YL 704 antibiotikum-elegyet 50 ml (benzolban oldjuk. Az oldathoz n-tfiexánt adunk cseppenkint, az oldat fehér színben mutatkozó megzavarodásáig. Ezután hűtőszekrényben állni hagyjuk, 10 majd á levált kristályokat szűréssel elkülönítjük. Ily módon 2,9 g kristályos YL 704 antifoiotikuin-elegyet kapuink, prizmás kristályok alakjában. 15 5. példa: Az YL 704 A és YL 704 B antibiotikumok kromatográfiás szétválasztása A 4. példában leírt eljárással kapott 3 g YL 704 antibiotikum-elegyet 20 ml kloroformban oldjuk. Az oldatot egy 300 g szilikagélt („Kiesel-gel H", Mere. & Go. gyártmánya) tartalmazó, 60 cm magas, 5 cm átmérőjű oszlopra öntjük. Az oszlopot 100 tf. rész kloroform, 0,5 tf. rész 80%-os ecetsav és 3—,6 tf. rész metanol elegyével eluáljuk, dűO ml-es frakciókat fogva fel. Az 1—250. frakcióban a metanoltartajom 3 tf. rész, a 25(1—i350. frakcióban 4 tf. rósz, a 351—600. frakcióban 5 tf. rész és a 600. utáni frakciókíhan 6 tf. rész. Ily módon eljárva az YL 704 A antibiotikum a 271—(661. frakcióban, az YL 704 B antibiotikum padig a 631—771. frakcióban eluálódik. A 331—489. frakciót egyesítjük és az oldószert elpárologtatjuk; ily módon 550 mg YL 7(04 A antibiotikumot kapunk száraz (por alakjában; a 662—76il. frakcióból ugyanilyen módon 480 mg YL 704 B antibiotikumot nyerünk ki. A fenti módion kapott YL 704 A ill. YL 704 B antibiotikumot külön-külön kristályosítjuk benzol és n4iexán elegyéből; mindkét terméket fehér vagy gyengén halványsárga kristályok alakjában kapjuk. 6. példa: 50 Az YL 704 A és YL 704 B antibiotikumok szétválasztása: ellenáramú megosztással EC A 3. példa szerinti eljárással kapott 200 mg YL 704 antibiotikum-elegyet ellenáramú megosztásnak vetjük alá, Mac Ilvain-féle pufferoldat i(pH ;= 4,0) alkalmazásával. A műveletet Craig-berendeziésben végezzük. Száz fokozat 60 után az YL 704 A antibiotikum az 51—71. csőben, ;az YL 704 B antiibioitikum pedig a 24^30. csőben gyűlik össze. A két terméket különr-külön bepároljuk ós így száraz por alakjában kap-65 juk az YL 704 A ill. YL 704 B antibiotikumot. 8
