160370. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenolformaldehid gyantakomplexeinek előállítására
9 mított fenoltartalma 20 g, felhígítunk 1 liter űsapvízzel, majd keverés köziben, Vékony sugárban a Bi2-ivitamin és Bi2-vitamin faktor III tartalmú oldathoz öntjük. A lúgos oldat pH-órtékét 10i%,-os HCl oldat- " 5 tal 2,5-re állítjuk és az elegyet kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat kobalamin tartalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után ezt a rózsaszínű io csapadékot kevés kovafölddel fedett porcelán szívószűrőn gyűjtjük össze. A rózsaszínű nedves csapadék súlya 132 g. A gyanta komplex papírkromatográfiás menynyiségi meghatározás szerint 159 mg B]2-vita- 15 mint és 35,8 mg B^^vitamin faktor HI-at tartalmaz. 5. példa: 20 20 liter, az előző példában részletezett metanolbaktériumos kiivonat szűrletóhez, melynek 182,6 mg a Bi2-ivitamin és 6:2 mg a Bi2-vitamin faktor III tartalma, hozzáadunk 60 g kovaföldet. Ezután 50 ml koncentrált gyantaoldatot öntünk 25 hozzá az előző példában részletezett módon. A lúgos oldat pH értékét 10%-os HCl oldattal 6,0-ra állítjuk és kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat koibalamin tartalmát mennyiségileg megköti. 3Q A keverés befejezése után ezt a rózsaszínű •csapadékot kevés kovafölddel fedett porcelán szűrőn gyűjtjük össze. A rózsaszínű nedves csapadék súlya 135 g. A gyantakamplex papírkromatográfiás meny- 35 nyiségi meghatározás szerint 164 mg Bi2-vitamint és 55 mg Bt2-vitamin faktor IH-at tartalmaz. 6. példa: 40 Fermentációból származó 20 liter ciánidimentesen feltárt, fénytől védett körülmények között nyert és fehérjamentesítés után szűrt, kivonathoz 60 g amorf kovasavat adunk. A kivonat papírkromatográfiás meghatározás szerint 187 mg Bi2 -ikoenziimet tartalmaz. Ezután 50 ml 40%-os fenol-formaldehid gyanta koncentrátumot, amelynek monomerre számított fenoltartalma 20 g, felhígítunk 0,5 liter csapvízzel, majd keverés köziben, vékony sugárban a Bi2-ikoenzim tartalmú oldathoz öntjük. A műveletet továbbra is fénytől védett helyen végezzük. A lúgos oldat pH értékét 1'0%HOS HCl oldattal 4,2-re állítjuk és kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat koibalamin tartalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után könnyen ülepedő rózsaszínű csapadékot nyerünk. Porcelán szívószűrőbe helyezett szűrőlapra kevés amorf kova- eo savat teszünk, a csapadékos vizes oldatot ezen átszűrjük, kevés desztillált vízzel átmossuk, majd gyenge légáraimban szobahőmérsékleten megszárítjuk, végül finoman elporítjuk. eg 10 Papírkromatográfiás meghatározás szerint a 1(1)3 g száraz gyantakamplex összesen 180 mg Bi2-koeittsimet tartalmaz. 7. példa: Kromatográfiás elválasztásból származó 1,10 g Bi2-tkaenzitmet tartalmazó, fénytől védett körülmények között nyert 3 liter vizes eluátumhoz 3 g amorf kavasavat adunk. Ezután 7,5 ml 40i%-os fenol-farmaldehil gyanta konoentrátumot, amelynek monomerre számított fenoltartalma 3 g, felhígítunk 50 ml desztillált vízzel és keverés köziben, vékony sugárban a Bi2-koenzim tartalmú oldathoz öntjük. A művelet elvégzésénél továbbra is gondosan kell ügyelnünk arra, hogy fénytől védett körülrniények között dolgozzunk. Ezután a lúgos oldat pH értékét 10%-os HCl oldattal 4,.2Kre állítjuk és kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat kozenzim tartalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után a könnyen ülepedő rózsaszínű csapadékot porcelán szívószűrőn öszszegyűjtjük, kevés desztillált vízzel átmossuk, majd gyenge légáramban, szofbahőimérsékleten megszárítjuk és finom porrá őröljük. 7,10 g halvány rózsaszínű, vízben nem oldódó terméket nyerünk, mely grammonként 139,5 mg Bi2-koenzimet tartalmaz. A nyert termék tehát a kiindulási hatóanyagot csaknem teljes mennyiségben tartalmazza. A megszárított anyag őrlését, porítását, valamint kiszerelését már normál világítás mellett is elvégezhetjük a hatóanyag bomlása nélkül. 8. példa: Kromatográfiás eljárással nyert 30 liter vizes eluátumhoz, mely spektrofotometrikus meghatározás szerint 9,18 g hidroxokobalamint tartalmaz, 30 g kovaf öldet adunk. Ezután 75 ml 40%os fenoWormaldehid gyanta koncentrátumot, amelynek monomerre számított fenol-tartalma 30 g, felhígítunk 0,5 liter deszt. vízzel és keverés közben, vékony sugárban a hidroxokofoalaimin tartalmú oldathoz öntjük. A lúgos oldat pH értékét 10%-os HCl oldattal 4,2-re állítjuk és kb. fél óráig tovább keverjük. Ezalatt a kivált csapadék a vizes oldat hidroxokobalamin tartalmát mennyiségileg megköti. A keverés befejezése után a rózsaszínű csapadékot porcelán szívószűrőn összegyűjtjük, deszt. vízzel átmossuk, majd vákuummal tovább szívatva, a nuoosnedves csapadékot gyenge légáramban, szobahőmérsékleten megszárítjuk és finom porrá őröljük. 63,0 g halvány rózsaszínű, vízben nem oldódó terméket nyerünk, mely grammonként 145,0 mg hidroxokobalamint tartalmaz. A kapott termék a kiindulási hatóanyagot 99,4%-ban tartalmazza. §
