160370. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinvázas vegyületek fenolformaldehid gyantakomplexeinek előállítására
160370 6 A formaldehid teljes hozzáadása után vízfürdőn még 1 óra hosszat melegítjük az elegyet, hogy a kondenzáció teljesen végibemenjen. Ezután lehűtjük szobahőmérsékletre, majd részletekben további hűtés mellett, 740 ml 40fl /o-os nátronlúgot adunk hozzá. Az elegy térfogatát 2300 ml-ne egészítjük ki (kb. 2ll'2 ml desztillált víz hozzáadásaival) és így közvetlenül használhatjuk a korrinoidok leválasztására. A koncentrátum híganfolyó, erősen- lúgos, kezdetben halvány barna színű, de napok múlva meggyvörös színt ölt. Az elszíneződés nem befolyásolja a leválasztás hatásfokát. Az előállított 2500 ml gyantaoldat, amelyben a kötött fenoltartalom 1 kg, 1000 liter szűrt és résziben fehérjementesített fermentlé lecsapásához elegendő. A feldolgozásra kerülő fermentlé általában 2—14 g Bt2Jvdjtamint tartalmaz, anorganikus sók és egyéb, a fermentációt kísérő szerves anyagok mellett. A leválasztást előnyösen oly módon végezzük, hogy a fermentlé feltárt és derített kivonatálhoz literenként 1-—3 g szűrési segédanyagot, pl. diatomaföldet, kovaföldet, amorf kovasavat, vagy egyéb ásványi terméket keverünk. A 40%-os fenol-kondenzátumból csapvízzel 2%os hígítást készítünk és ezt állandó keverés közben a kivonathoz öntjük. A kondenzátuim manynyiségét úgy szabjuk meg, hogy az a kivonatban célszerűen 0,1%-nyi mennyiségben legyen jelen. Hígított ásványi savval a kivonat pH-értékét 2,0—6,5 közé, előnyösen 4,2-re állítjuk. A kicsapódó gyanta rátapad a szűrési segédanyagra és minit könnyen mozgó csapadék, a kivonatban jelenlevő Bi2-vitamint, valamint a kísérő összes korrinoidot mennyiségileg megköti. A kisniannyiségű rózsaszínű csapadék kiválóan szűrhető, ily módom világos, közel színtelen, éles szűrletet kapunk. A találmány szerinti eljiárás lényege tehát az, hogy korrinvázas vegyületeket tartalmazó vizes oldatokhoz, melyek lelhetnek koenzimek, továbbá hidroxil- cianid, nitrit, szulfit, rodanid csoporttal rendelkező származékok, fenolnak formaldehiddel savas közegben folyékony halmazáUapotú, polimer-molekulánként 2—5 fenolegységet tartalmazó gyantává történő kondenzációja útján kapott termék lúgos oHlatát adjuk, a fenolján kapott termék lúgos oldatát adjuk, a fenoltf/súly% mennyiségi arányban, majd a közeget ásványi savval 2,i0 és 6,5 közötti, előnyösen 4,2 körüli pH értékre savanyítjuk és a képződött csapadékot elkülönítjük. Egy fenolnformaldéhid típusú kondenzációs termék B^-vitaminnal képzett szilárd komplexének az előállítását már említi az irodalom: a 150.346 sz. magyar szabadalmi leírás szerint elnyújtott hatású B12 -jvitamin készítményeket állítanak elő oly módon, hogy a Bi2-vitamin vizes oldatban egy többértékű femoMormaldehiddel képzett kismolekulájú kondenzációs termékével reagáltatják és a levált szilárd komplexet elkülönítik. A jelen találmány szerinti eljárás azonban mind műszaki célkitűzése és ki-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 viteli módja, mind pedig a lecsapószer minősége szempontjából teljesen eltér a 150.346 sz. magyar szabadalmi leírás útmutatásaitól. Az ismert eljárásiban lecsapószerként tölbbértékű fenolból, pl. rezorcinból képezik a lecsapószert formaldehiddel, így egy szilárd, alkoholban oldódó terméket, pl. metilén-direzorcint kapnak és ennek a kondenzációs terméknek az alkoholos oldatát adják hozzá egy tiszta, viszonylag koncentrált vizes B|2-vitamin oldathoz. Ezek a többértékű fenolokból képezett, már korábban is ismert kondenzációs termékek jól jelle^ mezfaetők, csupán két szubsztituált fenol metilénhíddal való összekapcsolásából állnak, és emellett szilárd termékek. A jelen találmány szerinti eljárás olyan vizes fenol-formaldehid kondenzációs termékkel elélt leválasztásra vonatkozik, melyben 2—-5 molekula fenollal jön létre kondenzáció. A keverék pontos kémiai jellemzése igen nehéz és bonyolult vizsgálatokat tenne szükségessé. Szuibsztituált fenolszármazékok, így pl. a klórfenol, krezol, xilenol stb. hasonlóan elkészített kondenzátuimai távolról sem adnak olyan effektust, mint maga a fenol. Ismeretes, hogy a korrinoidok fenolban és származékaiban, valamint ezek apoláros oldószerrel kevert elegyeiben hidrogénhídkötés segítségével egyaránt jól oldódnak. A fenolnformaldehid kondenzátumok azonban kedvezőbb leválasztást adnak, mint a helyettesített fenolokból formaldehiddel képzett kondenzációs termékek, amelyeikben az előbbiekhez hasonlóan megvannak a korrinoid leválasztáshoz szükséges hidrogenhid-kötesre alkalmas szabad fenolos GH>gyökök. Ismerve továbbá azt, hogy a fenol 6%-foan oldódik vízben, távolról sem volt előre látható, hogy feltárt és előkezelt ferimentlevek gyengén savanyú oldatából 0,1% fenoMormaldahid gyantával a korrinoidok mennyiségileg leválaszthatók. A találmány szerinti eljárással mikroorganizmusok ciánmentes feltárásával készült kivonataiból a kristályosodó koenzimeket is kötnynyen le lehet választani, de alkalmas ez az eljárás a hiidroxokobalamin vizes oldatainak betöményítésére, valamint értelemszerűen bármelyik Bi2HCSoportlbeli vitamin kinyerésére is. Jól alkalmazható továbbá ez az eljárás tisztított májkivonatok feldolgozására is, amikor a hőkezeléssel nyert vizes kivonatok szűrleteiből a Bi2-vitaimint, valamint az egyéb, eddig nem definiált haemopoetikius faktorokat kívánjuk egyszerű módon elkülöníteni. A megszárított korrinoidHfenoWormaldehid gyantakomplex heterogén termék, olvadáspontja nincs; vízben nem oldódik, szerves oldószerrel, pl. aoetonnal, alkohollal, fenol-kloroform eleggyel készült oldatának színe sem jellemző, a komplex megbontása útján kapott korrinoid tartalma viszont mennyiségileg jól mérhető papírkromatográfiás elválasztás után. A gyanta komplex papírkromatográfiás elemzését az alábbiak szerint végezzük: 3
