160281. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a cefaloglicin antibiotikum tisztítására
160281 szennyezések eltávolítása céljából leszűrjük. A szűrlethez vizet adunk és így kicsapjuk a 7-aminocef alosporánsav-tozilát-dihidrátot; ezt szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd szobahőmérsékleten, levegőn megszárítjuk. Vegyes anhidrid képzése. A kapott nátrium-3-(D-alfa-karboxibenzilamino)-krotonátot katalitikus mennyiségű N.N-dimetilbenzilaminnal acetonitrilben szuszpendáljuk egy üvegbélésű vagy rozsdamentes acélból készült edényben és a szuszpenziót T- 10 °C és 0 "C közötti hőmérsékletre hűtjük le. Klórhangyasavmetilésztert adunk gyorsan hozzá és az elegyet néhány percig- keverjük, az N-védett fenilglicin-vegyes anhidrid képzése céljából. Eközben a 7-aminocefalosporánsav-tozilátot 50 tf% víz és 50 tf% acetonitril elegyében, 0 °C és 5 °C közötti hőmérsékleten az oldható trietilamin^sóvá alakítjuk át. Acilezés és az N-védőcsoport eltávolítása. , A fenti módon képezett vegyes anhidridhez keverés közben, gyorsan hozzáadjuk a 7-aminocefalosporánsav-trietiíaminsó oldatát. A keverést még néhány percig folytatjuk, majd az esetleg jelenlevő nem oldódó részi trietilamin hozzáadásával oldatba visszük. További 1,5 órai keverés után az oldat pH-értékét tömény sósav —5 °C és +5 "C közötti hőmérsékleten történő hozzáadása útján 1,5-re állítjuk, hogy így lehasítsuk az aminocsoport védőcsoportját a cefaloglicin-molekuláról. Ezután metanolt adunk hozzá, további 1,5 óra hosszat keverjük, a pH-értéket pedig 4,5-re emeljük a nyers cefaloglicin-kristályok lecsapása céljából. A metanol hozzáadása növeli a leváló kristályok méretét és így könynyebben szűrhető vagy centrifugálható cefaloglicint kapunk. Atkristályosítás és tisztítás. A fenti módon kanott nyer^ cefaloglicint újból feloldjuk víz, acetonitril és metanol 1:1:1 tf. arányú elegyében, sósavat alkalmazva az oldás teljessé tételére, majd trietilamin hozzáadásával a cefaloglicint újból kicsapjuk az oldatból. Az így lecsanott cefalo<rHcint metanollal mossuk, majd vákuumban, 30 °C hőmérsékleten súlyállandóságig szárítjuk. Ily módon lényegileg vízmentes, vagyis 0,5 súry%-nál kevesebb vizet tartalmazó cefaloglicint kapunk. Ha a nyers cefaloglicin ol-' dására víz, acetonitril és metanol 2:1:1 tf. arányú elegyét alkalmazzuk a fent említett 1:1:1 tf. arányú elegy helyett, akkor a femlglicin még tökéletesebb eltávolítását érhetjük el, a lecsarjáskor azonban valamivel ki'.ebb hozammal kapjuk a tisztított kristályos cefaloglicint mint az 1:1:1 arányú elegy alka1 m< : i7'5si esetén. (Kitermelés mindkét esetben 80% felett.) 10 Űjrahidratálás. A kapott lényegileg vízmentes cefaloglicint belső keverővel felszerelt vákuum-szárítóban ionmentesített vízzel keverjük, majd a víz feleslegét vákuum-szárítás útján eltávolítjuk és a kapott cefaloglicin-dihidrátot a kívánt mértékben megőröljük. A kiindulási anyagok és a végtermékek tisztaságának vizsgálata. A 3. példában ismertetett módon nyers cefaloglicint állítunk elő. A termékből két mintát ana-15 lizálva az alábbi eredményt kapjuk. Aminosav Mintaszám UV E1 /'^ (260 mu)Fenil-20 ^TM 25 30 35 40 45 50 55 60 (185 A) 1 (185 B) 2 191 196 5,32% < 0,1% 5,94%<0,1% A nyers cefaloglieinből vett mintákat az alábbiak szerint tisztítjuk: Az 1. és 2. sz. mintából 5—5' g nyers cefaloglicint elegyítünk és az elegyített 10 g nyers cefaloglicint 100 cm3 vizet, 50 cm 3 acetonitrilt és 50 cm3 metanolt tartalmazó oldószer elegy ben (2:1:1 térfogatarány) oldjuk, sósavval elősegítjük az oldódást, miközben az elegy hőmérsékletét 0—5 "C között tartjuk. Ezután trietilami.nt adunk az elegyhez és ily módon a pH-t a cefaloglicin kicsapódási pontjának, megfelelően (kb. pH 4,5) állítjuk be. A kicsapódott cefaloglicint szűrjük és 30 cm3 2:1:1 arányú fenti oldószereleggyel mossuk, majd 50 cm3 metanollal és acetonitrillel leülepítjük, a vizet eltávolítjuk. A tisztított cefaloglicin analízisének eredménye a következő: -i% UV EJ TMm (260 mu) Fenilglicin 7—ACA 216 <0,01% <0,1% A cefaloglicin elméleti tisztasága Beckmann DU ultraibolya spektrofotométeren 220. A leolvasást csekély mértékben befolyásolta az illékonyanyag-tartalom, mint pl. a víztartalom, de a cefaloglicin minták víztartalmát külön analízis során nem határoztuk meg. Szabadalmi igénypontok 1. EFárás a cefaloglicin antibiotikum tisztítására, azzal jellemezve, hogy a tisztítandó cefalo-85 glicint acetonitril, metanol és víz oly elegyében 4
