160198. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az SL 3364 antibiotikum előállítására
160198 aminosavak stb., nitrogénforrásként, továbbá a szokásos ásványi sókat és nyomelemeket. Az új antibiotikum előállítására a találmány értelmében folyékony táptalajt beoltunk a Sepedonium chrysospermum új törzsének miicéliumszuszpenziójával, és a tenyészetet 18°-on inkubáljuk. A tenyésztést aerób körülmények között a felületen vagy süllyesztve rázás közben vagy fermentorokban levegőztetés vagy oxigén átburkoltatása és keverés közben végezzük. Amikor fcb. 8 nap elmúltával maximális antibiotikum mennyiség képződött, a fermentlevet leszűrjük, és az antibiotikumot a micéliummentes tenyészoldatból és az előzőleg mechanikusan szétroncsolt micéliumból extraktiv vagy adszorptív munkamódszerekkel önmagában ismert módon kinyerjük. Az egyik különösen jól bevált módszer szerint a fermentléből elkülönített micéliumot mechanikusan elroncsoljuk, az antibiotikumot a micéliumot tartalmazó vizes oldatból kloroformextraháljuk, és a micéliummentes tenyészoldatot etilacetáttal extraháljuk, noha erre a célra más szerves oldószerek, például benzol, kloroform, butilacetát, metilénklorid vagy butanol is alkalmasak. Az új antibiotikum a kivonatokból kromatografálással elkülöníthető. Az SL 3364 új antibiotikum jellemzői a következők: vörösesbarna kristályok, elemi összetétele: C 69,6, H 5,7, O 24,2%. olvadáspontja 169—171 °C fajlagos forgatóképesség: [ia]20 D = —388° (c = = 0,06 kloroformban), ultraibolya színkép (metilénkloridban: (1. ábra) I max = 243 nm (log e' = 1,48), 308,5 nm (log E' = 1,61), 380 nm (log «'=2,10).' infravörös színkép (metilénkloridban): (2. ábra) sávok többek között: 1740, 1717, 1630, 1603 cm-1 ^nél. Az új antibiotikum kitűnik érdekes farmakológiai tulajdonságaival, és ezért gyógyszerként használható. Az új antibiotikuiríha'k erős fungisztatikus hatása van gombafertőzések különféle okozóival szemben. Említésre méltó különösen a jó in vitro hatás a következő gombákkal szemben: Trichophyton mentagrophytes Trichophyton tonsurans Trichophyton rubrum Epidermophyton floccosum Microsporum canis Microsporutn audouinäi Legkisebb gátló koncentráció 10 y/ml 10 y/ml 10 y/ml 3 y/ml 10 y/ml 3 y/ml Ezenkívül az új antibiotikumnak kifejezett citosztatikus hatása van, miként az bebizonyosodott in vitro egy egértumorból származó sejttörzsön (P—£15—mastocytom). Az új antibioti-5 kum in vitro 1,5 mg/liter koncentrációban 50 %-kal csökkenti a sejtszaporodást. I, p. injekció után az új antibiotikum hatására az olvadási idő jelentősen csökken. Általában nagy emlősállatokra 50—1000 mg-os 10 adagban bizonyult előnyösnek, célszerűen naponta beadva. Perorális alkalmazásra 50—1000 mg-os adagok alkalmasak, folyékony vagy szilárd hordozóval kikészítve. Helyileg porok, kenőcsök, tinktúrák vagy permet alkalmazhatók 15 0,1—2% hatóanyagtartalommal. A következő példában ismertetjük az eljárás végrehajtását anélkül, hogy azt erre kívánnánk korlátozni. Minden hőmérsékleti adatot Celsiusfokokban adunk meg. Az olvadáspontokat Kof-20 ler-tömbön határoztuk meg. Példa: Egy ferméntorban 10 liter következő összetételű táptalajt 2f> 30 45 50 (S0 cerelóz tripton NiaN03 K2HPÖ4 KCl MgSO/,-7 H2 0 FeSCv7H2 0 g 40 5 3 1 g 500 mg 500 mg 10 mg ionmentesített vízzel kiegészítve 1 literre, beoltunk a Sepedonium chrysospermum NRRL 35 3489 törzsének micéliumszuszpenziájávfjl, és levegőztetés (1,0 liter levegő/perc/liter tápoldat) és keverés (150 fordulat percenként) közben 8 napig 18°-on inkubáljuk. Ezután a fermentlevet cellitrétegen átszűrjük, és a szűredékből az 40 antibiotikumot etilacetátAal extaaháljuk. A micéliumot metanolban Ultra-Turraxszal feltárjuk, leszűrjük, és metanol és víz 9 : 1 arányú elegyével mossuk. A metanolt ledesztilláljuk, és a vizes fázist kloroformmal extraháljuk. A kapott nyers kivonatot sósavval mossuk, és szárított kovcisavgélen (Merck, 0,05—0,2 mm) kromatografáljuk. Az SL 3364 antibotikumot 99 :1 arányú kloroform-metanol eleggyel eluáljuk, és metanolban többször átkristályosítjuk. Az új antibiotikumot narancsszínű, 169—171°cn olvrjdó kristályok alakjában kapjuk. A beoltásra használt mieéliumszuszpenzíó két fokozatban készül. Először az eredeti izolált minta tenyészetét 8 napig 27°-on a következő 55 agaros táptalajon tenyésztjük: cerelóz szálasagar malátakivoniat élesztőkivonat pepton KH2PO4 MgS04 -7H 2 0 20 g 20 g 2 g 2 g 2 g 2 g 2 g C5 ionmantesített vízzel kiegészítve 1 literre.
