159842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fibrinolizokináz előállítására mikroorganizmusokból
5 A közel tiszta centrifugált oldatot pl. pH 1,5-re állítjuk be és 15 percig 65 °C-on tartjuk. Azonnali lehűtés után a pH-t 7,5-re állítjuk és ismét centrifugáljuk. Az üledéket eldobjuk. A centrifugaiásnál nyert oldatot négyszeres 5 térfogatú —20 °C-ra hűtött acetonba öntjük. 5 percig keverjük, majd a keveréket +4 °C-on 3 órán át tartjuk. Az oldatot dekantálás után elöntj ük. Az üledéket ismételten hideg száraz aceton- io ban felvesszük és ebben alaposan diszpergáljuk, majd centrifugáljuk és a kapott üledéket vákuumban szárítjuk. Termelés kb. 50—80%. Dúsítás kb. tízszeres, fajlagos aktivitás: 2 CTA/mg. 15 Az St 24 törzs az 1., 2. és 3. táblázatban megadott fajtajellegzetességeket mutatja és Streptomyces griseus Waksman et Henrici-nek tekinthető [Waksman, S. A., „The Actionomycetes" Vol. II, The Williams and Wilkin? 2C Comp., Baltimore (1961)]. 3. példa: 3% glicerint, 0,4% glikokollt, 0,25% kukoricalekvárt, 0,4% szójalisztet, 0,1% NiaCl-t, 0,1% K2 HP0 4 -t, 0,01% MgS0 4 -7 H 2 0-t, 0,01% FeS0 4 •7 Ha O-t és 0,01% CaC0 3 -t tartalmazó 100 ml tápoldatot (60 percig 121 °C-on sterilizálva) a 2. -példa szerinti St 24 törzzsel beoltunk. Háromnapos tenyésztés után olyan tápoldatot kapunk, amely 10,2 CTA-egység/ml-t tartalmaz. A további feldolgozás az 1. és 2. példák szerint történik. 4. példa: A 3. példa szerinti 100 ml tápoldatot 1 ml spóraszuszpenzióval oltjuk be, melyet az St 18 törzs Plotho szerinti glicerin^glikokoll-agárral készített 10 napos ferde-agár tenyészete leöblítésével kapunk. Négy napon át rázógépen, 24 °C-on végzett tenyésztés után olyan tenyészoldatot kapunk, amely 5,3 CTA-egység/ml-t tartalmaz. A további feldolgozás az 1. és 2. példák szerint történik. Az St 18 törzs az 1., 2. és 3. táblázatban megadott fajta jellegzetességeket mutatja é« Streptomyces Chrysomallus Lindenbein-nek tekinthető [Lindenbein, W., Arch. Mikrobiol. 17, 361 (1952)]. 5. példa: 2% glükózt, 0,4% glikokollt, 0,25%, kukorica- 60 lekvárt, 0,25% szójalisztet, 0,1% NaCl-t, 0,1% K2 HP0 4 -t, 0,01% MgS0 4 -7 H 2 0-t, 0,01% FeS04 -7 H 2 0-t, 0,01% CaC0 3 -t tartalmazó 100 ml tápoldatot (60 percig 121 °C-on .sterilizál- 65 6 va) a 4. példa szerinti St 18 törzs spóraszuszpenziójával beoltunk és négy napon keresztül 24 °C-on végzett tenyésztéssel olyan tenyészoldatot kapunk, mely 4,2 CTA-egység/ml-t tartalmaz. A további feldolgozás az 1. és 2. példák szerint történik. 6. példa: A 4. példa szerint beoltunk olyan tápoldatokat, amelyek 2% glicerin, 0,4% glikokoll, 0,4% szójaliszt, 0,25% kukoricalekvár mellett még a 4. táblázatban feltüntetett sókoncentrációkat is tartalmazzák. Így a 4. táblázatban megadott termeléseket kapjuk. A további feldolgozás az 1. és 2. példák szerint történik. 7. példa: A 4. példa szerint beoltunk olyan tápoldatokat, melyek 2% glicerint, 0,25% kukoricalekvárt, 0,25% szójalisztet, 0,1% NaCl-t, 0,1% K2 HP0 4 -t, 0,01<y 0 MgSCv 7 H 2 0-t, 0,01% FeS04 -7 H a O-t és 0,01%, CaC03 -t az alábbiak szerint 0,4% koncentrációban különböző aminosavakat tartalmaznak (60 percig 121 °C-on sterilizálva). Négy napon át 24 °C-on végzett tenyésztés után a következő termelési eredményeket kapjuk: Adalék (0,4%) CTA-egység/ml alanin 6,2 L-tirozin 0,31 L-lizin - 0,39 glikokoll 4,8 A további feldolgozás az 1. és 2. példák szerint történik. 8. példa: 60 liter 2% glicerin, 0,4% glikokoll, 0,24% kukoricalekvár, 0,4% szójaliszt, 5,1% NaCl. 0,1% K2 HP0 4 , 0,01% MgS0 4 -7 H 2 0, 0,01% FeS04 -7 H 2 0 és 0,01% CaC0 3 összetételű tápoldatot tartalmazó fermentort (melyet 60 percig 121 °C-on sterilizáltunk) beoltunk 15 jól kifejlett, Erlenmeyer-lombikban levő 100—100 ml azonos összetételű, St 18 törzzsel oltott tápoldattal, majd 24 °C-on való keverés és levegőztetés mellett tenyésztjük. A következő CTA-egység/ml értékeket tartalmazó tenyészoldatot kapjuk: 3
