159842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fibrinolizokináz előállítására mikroorganizmusokból
MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÄLMÄNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. XI. 05. (iBA—2307) Német Szövetségi Köztár"saság-beli elsőbbsége: 1968. XI. 22. (P 18 10 277.7) Közzététel napja: 1971. VIII. 08. Megjelent: 1972. XII. 30. 159842 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/10 Föltalálok: Dr. Frommer Werner vegyész, Dr. Wagner Otto vegyész, Wuppertal-Fiberfeld, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Farbenfabriken Bayer AG., Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás fibrinolizokináz előállítására mikroorganizmusokból Ismeretes, hogy az emberi vizeletből fibrinolizokináz, urokináz állítható elő. Ez az eljárási mód azonban a kiindulási anyag különleges volta miatt előnytelen. Ezen túlmenően a kináz-tartalom oly csekély, hogy egy gyógy- 5 szerdózis előállítására több száz liter vizeletet kell feldolgozni. [Astrup és Sterndorff, Nature, 170, 981 (1952)]. Ismeretes továbbá, hagy hemolitikus sztreptokokkuszból fibrinolizokináz nyerhető, ame- 10 lyet sztreptokináznak neveznek. Ennek az anyagnak gyógyászati alkalmazása azonban a magas antigén hatás és a szükséges tisztítási eljárás költsége miatt hátrányos, mert a gyógyszer árát rendkívüli mértékben megemeli, 15 [Markus és Ambrus, J. Biol. Chem. 235, 1673 (I960)]. Ismeretes továbbá fibrinolizokináz előállítása Bacillus subtilis-foől [Shimi és Kelada, Arch. Mikro'biol. 50, Nr. 4, 326 (1965)] és Pasteurelle 20 pestiséből [Beesley és tsai, J. Bacteriol. 1, 19 (1967)]. Ezeknek gyakorlati alkalmazása az ismert okok miatt nem lehetséges. Azt találtuk, hogy egyszerű módon rendkí- 25 vül nagy kémiai stabilitással rendelkező fibrinolizokináz állítható elő áktinomioeták tenyészoldatának pl. pH 1,5-ön való meleg kezelésével és az ezt követő frakcionált kicsapásával. Ennek az anyagnak a •molekulasúlya vi- 3o szonylag alacsony, így antigén hatást nem vált ki- " Lizokinázt termelő aktiriomicéta törzsek könnyűszerrel állíthatók elő a következő eljárással. Ilyen törzsek az aktinomicéták körében nagy számmal fordulnak elő. Talajmintákból — ismert módon — sugárgomba-félék rendjébe tartozó törzseket, különösen a streptomyces családhoz tartozókat, elsősorban a könnyű tenyészthetőség miatt a streptomyces fajtához tartozó törzseket különítettünk el. Ezeknek a törzseknek leoltásával tápoldatot tartalmazó tenyészlombikot oltottunk be, amelyek lehetővé tették a törzsek növekedését, így például alkalmazhatunk — Plotho szerint készített — glicerin-glikokoll-tápoldatot a következő összetételben: 2% glicerin, 0,25 % glíkokoll, 0,1% NaCl, 0,1% K2 HP0 4 , 0,01% FeS04 -7 H 2 0, 0,01% MgS0 4 -7 H 2 0 és 0,01% CaC03 . A növekedés gyorsításának elősegítésére célszerű még komplex szénforrásként pl. kukoricalekvárt (előnyösen 0,25% koncentrációban) vagy szójalisztet (előnyösen ugyancsak 0,25% koncentrációban) vagy mindkettőt a fenti tápoldathoz hozzáadni. Ebben az esetben az oldat pH-ártékét be kell állítani. Előnyös a tápoldat kezdeti pH-értékét 6,0 és 8,0 közé, különösen 6,5 és 7,5 közé beállítani. A tápoldathoz használt glicerin más szénforrással is helyettesíthető, így pl. glükózzal vagy 159842
