159815. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-aszparagináz előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNY! HIVATAf SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. III. 12. (SU—415) Közzététel napja: 1971. VII. 02. Megjelent: 1972. XI. 30. 159815 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 13/10 -,-i$'.i.s:í":'írlrf ,.,. Feltaláló: Robison Bobért S., vegyész, North Brunswick, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: E. R. Squibb and Sons, Inc., New York. Amerikai Egyesült Államok Eljárás L-aszparagináz előállítására A találmány tárgya új, javított eljárás az ismert L-aszparagináz enzim kinyerésére. Korábban az L-<aszparaginázt a következő összetételű táptalajon tenyésztett Escherichia coli (E. coli) sejtjeiből szabadították fel: 3,0% hasnyálmiriggyel feltárt kazein, 0,7% hasnyálmiriggyel feltárt szójababliszt, 0,25% glukózhidrát, 0,5% nátxiumklorid, 0,25% dikáliiumhidrogénfoszfát, csapvízzel 100%-ra kiegészítve. A találmány szerinti eljárásiban oltóanyag készül oly módon, hogy egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikban levő 50 ml steril táptalajhoz 0,25— 1,00 ml E. coli sejtszuszpenziót adunk. Az így beoltott lombikokat azután forgó rázógépen 2S—J37 C°-on 20-^24 óra hosszat inkubáljuk. Ezután az így készült oltóanyagból 0,5 tf%nyi mennyiséggel aszeptikusán beoltunk tetszés szerinti térfogatú steril táptalajt. Keverés közben 2ö—37 C°-on 18—-24 óra hosszat fermentálunk, majd a sejteket elkülönítjük, és meghatározzuk az L-aszparagináz tartalmat. A fermentáció során keletkezett L-aszparagináz kinyerésére a sejtszuszpenziót 3—8 C°-on centrifugáljuk, és így sejtpépet kapunk, ezt 0,001 M 8,0 pH-jú foszfátpuffer oldatban vagy csapvízben szuszpendáljuk, és 5 percig —15 és —5 C° között ultrahanggal roncsoljuk. A kívánt enzimet tartalmazó elroncsolt sejtszuszpenziót centrifugáljuk, és az így derített 10 15 20 25 30 folyadékfázisban 5,0 pH-nál in vivó meghatározzuk az aktív L-aszparagináz tartalmat a Campbell és munkatársai által közölt módszerrel [Biochemistry 6, 721—730 (1967)]. Noha a fent megadott táptalajon végzett fermentációval számbajövő mennyiségű L-aszparagináz állítható elő, a hozamok mégsem kielégítők. Meglepetéssel tapasztaltuk, hogy az L-aszparagináz hozamok jelentősen megmövelhetők, ha a fent megadott reakciókiözegben a glukózhidrátot glicerinnel helyettesítjük. A találmány értelmében a táptalajban használható glicerin .aránya 0,01 és 0,75 s% között változhat. Előnyösen a fermentációs közeg glicerintartalma 0,01—0,5 s%. A következő példák szemléltetik a találmányt. 1. példa: A) Vizsgálati táptalajok A következő összetételű táptalajt állítottuk össze: hasnyálmiriggyel feltárt kazein 3,00% hasnyálmiriggyel feltárt szójababliszt 0,70% nátriumklorid 0,50% dikáliumhidrogénfoszfát 0,25% csapvízzel kiegészítve 100%-ra 159815
