159745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 13béta-rövidszénláncú alkil-3-metoxi-17béta-hidroxi-8,14 szekogona-1,3,5(10),9(11)-tetraén-14-on vegyületek előállítására
159745 I. táblázat a fermentáció 3-Metoxi-8,l 4-szeikohőmérséklete -l,3,5(10),9(ll)-ösztratetraén-származékök ,, , , „ , , /ig/ml ."g/ml «g/ml •14,17-dion-származék 4 •14b-ol-17-onszármiazék 10 -17l/?-aH4-onszármazék 130 •14ct, 17^-diol-származék 45 20 105 50 55 70 40 II. táblázat 3-Metoxi-8,14-szeko-l ,3,-5(10),9(ll)-ösztratetraén-származékok -lto-17;/5-ol- _17 ; 5 _ -14>a-ol-14-on- j;^ -17-on-diol-SZE irTM a - származek zák származék Kontroll 212 #g 200 ,"g 25 «g Naftalin 236 #g 164 m ny a-naftol 310 •l«g 78 •m ny /J-naftol 386 m 32 PS ny a-na'ftilamin 220 m 124 Mg ny /5-n aftil amin 276 m 116 m ny a-naítalinszulfonsav 184 m 1124 ,"g ny /3-naítalinszulíonsav 216 m 132 «g ny Fenol 248 ;"g 176 m ny ny = kevesebb, mint 4 «g/ml 3. példa: A kísérleti körülmények teljes mértékben megegyeztek a 2. példában leírtakkal. Szübsztrátum'ként ez esetben 50—50 mg 13( ő-etil-3--metoxii-8,14-szeko-Jl ^JB^IO) ,9i(l 1 )-gortatetráén-14,17-idiont és 6 mg egy- víagy kétgyűrűs aromás poláros szu'bsztitiuenst tartalmazó vegyületet adagoltunk lombikodként. 24 órás 24 C°on végzett inku'bálás után mértük a keletkező termékek mennyiségét UV abszorpciójuk alapján. Az eredményeket a III. táblázatban foglaltuk össze 4. példa: Blake-ről lemosott Sacdharamyces uvarum (MNG 55) sejtekkel 50 literes saválló fermentort oltottunk. Indulási csiraszám 1,6 xlO6 sejt miienként. A táptalaj 4% malátafcivonatot és 3% szacharózt tartalmazott. A tenyésztést 20 liter levegő át áramoltatása mellett 180 fordulat/perc sebességű keverővel, 24 C°-on végez-10 15 20 25 30 35 40 50 55 60 tük. A 8 órás tenyészethez 25 g 3-nietoxi-8,14-r -3zeko-l,3,5(10),9)ll)-ösiztra; tetraén-14,17-dioiit és 3 g /J-naftolt adagoltunk. Az inkubálást tovább folytattuk 32 órán. keresztül a szubsztrát elfogyásáig. Ezután a teljes fermentlevet etilaoetáttal extraháltuk. III. táblázat l'3#-etil-3-metoxi-'8,! 14_ -szeko-il ,3,5(10),9(11)^gonatetnaén-iszármazékok -14a-17/?-diol ~17£-ol-14-on Kontroll Naftalin a-nafíol '/f-nalftol a-naftilamin /5-naftilamin o-naftalin-szulfonsav />'-naftalán szulfonsav Fenol 92 ,Mg/ml 204 ,/iíg/ml 27-2 ,//ig/ml 333 fig/ml 305 ,'(g/rrl 313 •/xgi/lml 130 /ig.'ml 235 «g/ml 238 /xg/ml 40 ,ug/ml ny ny nv ny ny ny ny ny ny = kevesebb, mint 4 ,«g/ml. Az etilacetátos extraktum vegyületeit vékonyrétegkromatogramról eluálva meghatároztuk az 1. példa szerint. 5% kiindulási vegyület, 85% 17i/?-hidroxÍJl4->oxo és 5%, 140,17^-dMdroxi származék jelenlétét mutattuk ki. Az extraktumot szárazra pároltuk és az olajos maradékot petrolétérrel tisztítottuk, majd a 3-metoxi-8,il4-szdk.o-! l,3,6|(10),9i(ll)-ösztr:atetr:aén^l7 / 5-ol-14-ont kristályosítottuk. 17 g kristályos terméket nyertünk. Op.: 112—-114 C°, (a)D — — —38° (c = 1, dioxán). E265 = 20 700 (metanol). 5. példa: A tenyésztés körülményei azonosak voltak a 45 4. példában ismertetettekkel. Szubsztrátként 15 g 13^-©til-3-metoxi-l 8,ll4-szeko-l,3,i5í(10),i9{ll)-gonatetraén-44,17-dion vegyületet adagoltunk 3 g /Pnaftollal együtt. 36 órás 24 C°-on végzett fermentáció után a teljes fermentlevet etilacetáttal extraháltuk,, majd az etilacetátos extraktum UV-pozitív vegyületeit vékonyréteg kromatogrtamon eluálva meghatároztuk. 13% kiindulási vegyületet és 70% 17/3-hidroxi-<14--oxo származék jelenlétét mutattuk ki. Az extraktumot szárazra párolva petroléterrel tisztítottuk, majd kristályosítottuk a lS/i-etil-3-metoxi-8,14-szeko-l,3,5í(10),9i(lil)-gionatstraén-17/?-ol-14-ont. 5,6 g kristályos terméket nyertünk. Op.: 85,8°, (a)D = +13° (c = 1 dioxán). E 265 = = 20 500 (metanol). 6. példa: Blake-ről lemosott Sacdharomyces uvarum 65 (M:NG 55) sejtekkel 60 literes saválló fermen-3
