159630. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bizonyos allergének ellen hatásos reaginimmunoglobulinek kvalitatív és/vagy kvantitatív meghatározására vizes mintákban és az eljárás kivitelezésére alkalmas reagens-kombináció

7 159630 8 lóképpen a fluoreszcein mérése is a szokásos módon lefolytatható. Az allergént megkötött állapotban 'tartalmazó polimer mennyiségét többek között az szabja meg, hogy a kísérlet során milyen érzékenysági 5 szint elérése szükséges. A reagin-Ig-nek megfelelő ellenanyagok mennyiségét aszerint választjuk pl., hogy az ellenanyagok mennyiségéhez képest felesleg legyen a polimeren megköthető ellenanyagok kombinációs helyzetei- io hez képest, miután az allergének reagin-Ig-vel teljesen telítődték. Hasonlóképpen a jelzett ellenanyagok és a jelzett reagin-Ig mennyiségét is úgy választjuk meg, hogy a polimeren megköthető anyagok kombinációs helyzeteinek 15 maximális számában felesleg maradjon. A találmány szerinti eljárás során használt kísérleti allergen egyetlen a'llergén'ből, esetleg két vagy több allergen keverékéből állhat. 20 Az utóbbi esetiben az eljárás azzal a külön előnnyel jár, hogy a vizsgálat során gyors pozitív vagy negatív válasz kapható arra a kérdésre, hogy egy nagyobb allergen csoporton belül az egyik vagy több allergénnel szemben ta- 2s pasztaiható túlérzékenység. Pozitív válasz esetén természetesen további kísérletek szükségesek annak megállapítására, hogy nagyobb allergen csoporton belül a paciens esetében melyik specifikus allergénnel szemben áll fenn túlérzékenység, A találmány szerinti eljárás felhasználható a reagin-Ig mennyiségi meghatározására is. Ebből a célból a kísérleti szérum sorozatban hígított mintáit analizáljuk és az eredményt ú úgy fejezzük ki, hogy az analóg módon vizsgált standard oldattal "összehasonlítást végzünk. A találmány, oltalmi körébe tartozik a bizonyos allergéneknek megfelelő reagin immunoglobulin (reagin-Ig) meghatározására vizes mintákban alkalmas kísérleti reagens-kombináció is, amely a fentiekben vázolt eljárás sarán alkalmazható. Ez a Reagens-kombináció azzal jellemezhető, hogy két, célszerűen pedig három _reagens!ből áll, éspedig az első reagense kísér- 45 leti allérgéiit kötött állapotban tartalmazó valamely vízben oldhatatlan polimer. ' második reagense az I^-reagensne^,niegMBő^ejianyagokból áll, harmadik reagense „adott esetben a -reagin-Ig, emellett;" ä Tílrmadik reagens távol- ~50 Tétében, a reagin-Ig-nek megfelelő ellenanyagok sugárzás kibocsátására alkalmas jelzéssel vannak ellátva, míg a harmadik reagensnek szintén sugárzás kibocsátására alkalmas"'jeí,Ssése van, továbbá a reagens-kombináción "belül 55 az első reagens a reagin-Ig-t tartalmazó vizes kísérleti mintával in vitro reakcióiba képes lépni és a reagin-Ig a polimerre felvitt kísérleti allergénhez kapcsolódik, a második reagens célszerűen a harmadik reagenssel együtt, a meg- 60 kötött kísérleti allergént tartalmazó vízoldhaitatlan polimerrel és reagin-Ig-wel reakcióképes j alakban van, a reagensekből álló keverék oldhatatlan polimert és ehhez kötött anyagokat, gs továbbá egy sugárzó folyadékfázist tartalmazó oldhatatlan anyagból áll, emellett az oldhatatlan polimer és a folyadékfázis sugárzásintenzitása a kísérleti mintán belül a reagin-Ig ellen hatásos kísérleti allergen koncentrációjával arányos. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiviteli változata szerint az oldhatatlan polimert szemcsés alakiban használjuk. A reagens-kombináció egyes reagensei egység-^csomagolásban hozhatók forgalomba és így felhasználhatók allergiás paciensektől vett vérminták elemzésére. A találmány szerint a kísérleti eszközök ampullából vagy hasonló tartályból állnak, amelyek egyrészt a reagin-Ig-nek megfelelő ellenanyagokat, célszerűen szárított, pl. liofilizált alakban tartalmazzák, sőt lehetőleg a jelzett reagin-Ig is célszerűen szárított, pl. liofilizált alakban kerül forgalomba ampullában. Ha pedig az utóbb említett ampulla nem kerül felhasználásra, akkor a reagin-Ig ellen használt ellenanyagok vannak jelzett állapotban. Az alábbi példák a találmány szerinti eljárás részletes szemléltetésére szolgálnak. 1. példa: Állati allergén-nek (kutya-epitéliuim) megfelelő reagin-Ig ellenanyag meghatározása A. Kémiailag kötött allergént tartalmazó műanyagszemcsék előállítása Kiindulóanyagként dextránból és epiklórhidrinből előállított -kopolimert használunk finomszemcsés állapotban. A kopolimer glicerinéter hidakkal térhálósított dextránból áll (Saphadex» szemcsemérete 1—10 mikron). A kopolimer vízben oldhatatlan, azonban duzzad; a termék 1 g száraz anyagra számítva kb. 2,5 g vizet abszorbeál. Az oldhatatlan polimert először ciánbramiddal aktiváljuk (vö. Axén, Porath and Ernbadk, Nature, Vol. 24, 1302. oldal, 1967) akként, hogy 5 g polimerhez 200 ml, 5 g GNBr-ot tartalmazó vizes oldatot adunk és a pH-értóket 2 percig 10,5-ön tartjuk 1 n NaOH csepegtetéssel való beadagolásával. A részecskéket ezután vízzel mossuk, majd kereskedelmi forgalomban beszerezhető kutya-epitélium allergen kivonatát (Dome Ltd, Anglia) adagoljuk, amely 1 ml-ben 0,2 mg anyagot tartalmaz. 1 ml allergén-Mvonatra 100 mg aktivált polimert veszünk. Az allergént ezután az aktivált polimeren kémiailag megkötjük oly módon, hogy 24 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakció után a megkötött allergént tartalmazó kopolimer részecskékét centrifugáljuk és 0,5 mólos nátriumhidrogénfearbonát-oldattal, .0,1 mólos aaetátpuiÉerrel, 1% szarvasmarha szérumallbumint tartalmazó 0,1 mólos triszpufíferrel kétszer-kétszer mossuk. Ezután a részecskéket 1% szarviasmarha^szérumalbumint 4