159628. lajstromszámú szabadalom • Eljárás reumaszerű faktorok kimutatásárra

159628 4 olyan betegek klinikai ellenőrzésénél, amelyeknek vérszérumában pozitív reakciót találtak. A kémcsöves kísérletek titere ritkán haladja meg az 1 :5,000-es hígítást és ellentétben áll azokkal a ti terekkel, amelyeket vagy csersavval kezelt és vörösvérsejtekkel érzékenyített, vagy érzékenyített latex-szel végeznek, ezek titere ugyanis 1 : 100 000 felett lehet. A Waaler—Rose-féle birkasejt-^vizsgálat elterjedését megbízhatósága ellenére korlátozza az, hogy a vörösvérsejtek hordozóanyaga instabilis. Emellett a vörösvérsejtek szabványosítása és érzékenyítése időtrabló művelet, ezt pedig gyakorta kell elvégezni. A jelen találmány szerint folytatott kísérletekben használt reagens- nyúl-y-globulinnal érzékenyített latex-ből és egy puffer-rendszerből áll. A kísérletet úgy végezzük, hogy a vérszérumot kémcsöves sorozatkísérletekben kétszeresre hígítjuk a pufferoldat hígítószerként való felhasználásával, és a mintákhoz egyenlő térfogatban íatexreagenst adunk. A szérum-latex-keveréket tartalmazó kémcsöveket ezután két óra hosszat 56 C°-on és egy éjjelen keresztül +4 C°-on tartjuk. Ha a kísérleti szérumíban reumaszerű faktorok vannak jelen, a közvetlen reakció bebizonyítható a latexes reagens részecskéinek agglutinálódásával. Ha azonban a kísérleti szérum nem tartalmaz reumaszerű faktorokat, akkor a latexes reagens a folyékony közegben finoman eloszlatott állapotban marad. A reakció mértékeként szolgálhat az, hogy a kísérlet során milyen mértékű agglutinálódás történt. A latex^rendszer előállítására 0,15—14 mikron, előnyösen azonban 0,81 mikron átlagos átmérőjű polisztirol részecskéket használunk. Akrilgyantából való anyagrészecskék is alkalmazhatók. A reumaszerű faktorok meghatározását közönséges nyúl-y-globulinnal megfelelő módon nem lehet végrehajtani. A kísérlet elvégzése szempontjából döntő jelentőségű, hogy a nyúl-y-globulin antigén tulajdonságait megváltoztassuk. Ebből a célból a nyúl-y-globulint enzimes kezelésnek vetjük alá. A nyúl-y-globulin átalakítására számos enzimet vizsgáltunk és találtunk megfelelőnek. Ezek közül felsoroljuk a nyers és kristályos tripszint, kimotripszint és papaint. A gombaeredetű proteázok és a pépszín csak részben bizonyult hatásosnak. A nyúl-y-globulin találmány szerinti átalakításának tudományos magyarázata . még nem áll rendelkezésre, feltehetően arról van szó, ihogy a nyúl-y-globulin és a reumaszerű faktorok reakcióképessége attól függ, hogy hány szaíbad hely áll rendelkezésre a nyúl-globulin adszorpciója után a latex felületén. A glolbulin-molekulák iproteolitikus enzimek segítségével történő lebontása megfelelő módszert biztosít ahhoz, hogy a latex-szerkezet döntően fontos helyei hozzáférhetővé válnak a reakció lefolyására. A lebontott anyag hőkezelésével a természetes anyag szerkezete tovább is lebontható és így a kívánt reakcióképes felületi helyek kialakulnak. 5 Az emberi eredetű y-globulin azonban a fenti kezelés után sem Ibizonyult specifikusnak és nem alkalmas reagens célokra. Az emberi eredetű y-globulin kezelésével a latex érzékenyítése előtt a reakcióképesség nem növelhető meg, 10 ugyanakkor a reakció specifikussága megmarad. Az emberi és nyúl-y-globulint tartalmazó reagensek különbsége a szükséges puff er-rendszerek anyagi, jellegében is eltérő. Míg a borates puffer-rendszerben alkalmazott nátrium-15 klorid az emberi y-globulinnal érzékenyített latex reakcióképességét meggyorsítja, 0,1 mól feletti nátriumklorid koncentráció borates puffer-rendszerben a nyúl-y-globulin reakcióját akadályozza. Optimális reakcióképesség tapasz-20 tal'ható a iborátos puffer-rendszerben, ha a sókoncentrációt 0,025 mólosra állítjuk be. A találmány szerint reumaszerű faktorok kimutatására olyan vérszérumot használunk, amely a szűrőkísérletek során reumaszerű fak-25 torok szempontjából pozitív reakciót adott. A reagenst a kísérlet előtt 0,025 mólos borates pufferrel 1 : 20 ihígítási fokra állítjuk be. 10 db 1:2X75 mm-es üvegkémcsövet állványba elhelyezünk, a vizsgált szérum kettős hígítását 30 az alábbi módon végezzük: 0,1 ml vizsgálandó vérszérumot az 1. kémcsőbe pipettázunk. Az 1. kémcsőbe 1,9 ml 0,025 mólos borates puffert, míg a maradék kilenc 35 kémcsőbe 1,0 ml' pufferoldatot adunk. Az 1. kémcső tartalmát elkeverjük és ebből 1 ml-nyi mennyiséget a 2. kémcsőbe átviszünk. A 2. kémcső tartalmát elkeverjük és ebből 1,0 mlnyi mennyiséget a 3. kémcsőbe viszünk át. Az 40 egyik csőből a másik kémcsőbe történő öntést a kilenc kémcsőből álló sorozaton keresztül folytatjuk le és a 9. kémcső 1 ml-nyi térfogatát elöntjük. A 10. kémcső szolgál ellenőrzésként. A hígított reagensből 1,0*—1,0 ml mennyisé-45 get adunk mind a tíz kémcsőbe. A kémcsövek tartalmát jól elkeverjük és két óra hosszat 56 C°-on inkubáljuk. Ezután a kémcsöveket +4 C°-on éjjelen át állni hagyjuk. A reakció mértékére a részecskék agglutinálódásából és a 5Q - felülúszó fázis tisztaságából következtethetünk. Az eredményeket a következő értékekkel fejezzük ki: — negatív jelölés = (a kontroli-mintával öszg5 szehasonlítható egyenletesen eloszlatott szuszpenzió) ± 1 + 2+ 3+ vagy 60 4+ A következő táblázatok szemléltetik az olyan kimutatási kísérletek eredményeit, amelyeknél t;^ a latex-tárgylemezes szűrővizsgálatnál pozitív 2