159400. lajstromszámú szabadalom • Eljárás izohemantitest meghatározásra alkalmas, szolubilizált lipofil festékkel jelzett, vörösvértest strómát és szubcelluláris fehérje frakciót koncentráltan tartalmazó liofilizált készítmény előállítására
159400 vergetjük. Az oldott sorboxaethenből húszszoros desztillált vizes közegű véghígítást készítünk (1 v/v %)> és ebhez szavatolt minőségű Szudán-ifeketét adunk (100 ml. sorboxaethen hígításhoz + 2 g Sudan black). A telített elegyet ismételt összerázás után laborminőségű szűrőpapíron kétszer szűrjük. Megjegyzés: a centrifugáláshoz megadott gérték a centrifugapersely geometriai középpontjára vonatkozik. 10 2. Az Rh—Hr rendszer antitestjeinek vizsgálatára. Ezen antitestek inkomplet formai szobahőn (!) intenziven agglutinálják a készítményt; aspecifikus reakciót a megadott feltételek mellett nem kapunk. Érzékenysége a hagyományos (kolloidközeg + 37 C°) módszerrel azonos, ebből következően a készítmény laboratóriumi teszt-anyagként immunizáltak szűrésére is felhasználható. Eljárás hemantitestek kimutatására liofilizált készítménnyel: 15 A liofilizált készítményből felhasználás előtt desztillált vízzel 5 g/v %-os homogén szuszpenziót készítünk. Az előzetesen lecseppentett 20 vizsgálandó savóhoz 5:1 arányban teszt-szuszpenziót adunk, jól elkeverjük, majd a reakciót 5 percen belül a tárgylemez óvatos mozgatása közben értékeljük. Az esetleges, kétes eredményű vizsgálatot kétszeres mennyiségű vizsga- 25 landó savó lecseppentésével megismételjük. Az eljárás komplet és inkomplet antitestek vizsgálatára egyaránt alkalmazható, de inkomplet antitestek esetén fordított savó-teszt- 30 szuszpenzió arány (1:5) kívánatos. Az általunk feltalált eljárás illetve készítmény az alábbi diagnosztikai lehetőségeket biztosítja : 35 Mivel A1; A 2 , B, O, P, Rh—Hr tulajdonságait a kiindulási anyagot képező nativ vörösvértesttel összehasonlítva specifikusan megtartja, s a liofilizálás eddigi tapasztalataink szerint további antigenitás veszteséget nem okoz, . . . ... a készítmény alkalmazható: 1. ABO—P antigén standardként egyedi és standard savók hemantitestejeinek vizsgálatára. Az optimálisnak minősített 3 g% — 2,5 g%os dextrán-albumin reszuszpendáló közegben a készítmény agglutinábilitása a nativ vörösvértest szuszpenzióként megközelíti: 220 donorsavó 26,2 reguláris anti-A, illetve anti-B ellenanyagából 254 biztosan kimutatható volt. A fennmaradó 8 kétes, illetve negatív eredményű vizsgálat 5 esetében nativ vörösvértest QQ szuszpenzióikkal is hasonló eredményt kaptunk. Készítményünk „találati biztonsága" eszerint 98,8%-os. Az agglutinátum kialakulása igen gyors, AB csoporttulajdonságú egyének savójával fals pozitivitást nem észleltünk. g5 40 45 50 55 Megjegyzések: Az MN rendszer antitestjeinek vizsgálatára nem ajánlható, a papain emésztéssel analóg változásként M—N transziformációt észleltünk a kiindulási anyaghoz viszonyítva. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás hemantitest meghatározására alkalmas, liofilizálással konzervált, festett vörösvértest antigén standardok előállítására ismert módon plazmamentesítött vörösvértest masszából kiindulva, azzal jellemezve, hogy a hagyományos módon 0,9%-os konyhasó oldattal legalább háromszor mosott vörösvértest masszát 1:25 arányban desztillált vízzel kezelve hemolizáljuk, a kapott hemolizátumot ismételten 1:25 irányban desztillált vízzel hígítva gyakorlatilag hemoglobintól mentesítjük, és a szabad hemoglobintól mentesített strómából és szubcelluláris fehérjéből álló frakciót poliszorboxietilén típusú anyaggal szolubilizált lipofil festékkel, Szudán feketével, a festékre nézve 0,5—1,5 célszerűen 0,8—1J2 vegyes %-os oldatával kezelve +1 C°-tól, +10 C°-ig terjedő hőmérsékleten megfestjük, majd az anyagot 1:10 arányban desztillált vízzel hígítva a kicsapódó festett frakciót elkülönítjük, az elkülönített anyagot desztillált vizes közegű 2,5 vegyes %-os emberi albumint és 3,0 vegyes %-os dextránt tartalmazó oldattal reszuszpendáljuk, és a kapott szuszpenziót legfeljebb 37 C°-on önmagában véve ismert módon diofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a hemolizálást egyenletes keverés közben végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a hemolizálást 25—37 C°-on végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a lipofil festék szolubilizálását polioxietilénszorbitánmonooleáttal végezzük. 4
