159356. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin előállítására
9 159356 10 Az inkubációs idő hat nap, ezután a fermentációt folyamatossá alakítjuk át oly módon, hogy a fermentlé alapos felkeverése után össztérfogatának 1/10 részét elvesszük, s helyébe a leírt tápanyagok 1/10 részét —, illetve metanol- 5 ból 48 ml-et — tartalmazó 1 liter 30 C°-os csapvizet, majd a kukoricalekvár és prekurzor 1/10 mennyiségéből előzetesen elkészített vízben oldódó komplexet táplálunk. A metanol mennyisége a továbbiakban napi 48 ml. Az elvételt 10 és betáplálást a fenti módon 24 órámként megismételjük. A naponta elvett fermentlevet feldolgozzuk és a képződött B12 -vitamint és Bi2-vitaminhatású faktorokat papírkromatografálás után spektrofotométerrel határozzuk meg. Az elvett fermentlé 11 500 y/liter B12 -vitamint és 5400 v/liter Bia-vitiaminhatású faktort tartalmaz. A fenti módon leírt fermentlé B^-vitamintartalom növekedése az eddigi 7000 y/liter szinthez képest 59%. 15 20 A 34 C°-os fermentlé 1 literéhez' keverés közben annyi mészhidrátot adunk, hogy a pH 11,5 25 értékre álljon be. Ezen a pH értéken 15 percig keverjük a rendszert, majd 10%-os ferriklorid oldat hozzáadásával a pH-t 7,8-ra állítjuk be. Az így nyert csapadékos oldatot centrifugáljuk és a csapadékot eldobjuk. A tiszta vizes oldatban papúlkromiatográfiás módszerrel megmért B12 -vitamin»koncentráció 10 600 y/liter és a B12 -vitaminhatású faktorok mennyisége 4850 y/liter, ami a fent megadott fermentlé B12 -vitamintartalmára vonatkoztatva 92,5%, a Bi2 -vitaminhatású faktorok értékére vonatkoztatva 95,5% kitermelést jelent. 30 35 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás B12 -vita(min és B 12 -vitaminhatású faktorok előállítására, metántermelő vegyes baikitériumpopulációval anaerob szeptikus körülmények között, ismert táptalajon, 5,6-dimetilbenzimidazol prekurzor adagolásával lefolytatott fermentáció és a fermentációs termék feltárása útján, azzal jellemezve, hogy az 5,6-dimetilbenzimidazolt vízzel hígított kukoricalekvárral való melegítés útján vízben oldódó komplexszé alakítjuk és ebben az alakban adjuk prekurzörként a fermentációs közeghez, majd az így lefolytatott fermentáció termékeiként kapott fermentlében a baktériumtesteket 20 C° és 40 C° közötti hőmérsékleten a pH érték 11—12-re és ezt követően legfeljebb 30, célszerűen 15—20 percen belül 6—8-ra való állítása útján tárjuk fel. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosításii módja, azzal jellemezve, hogy a prekurzor-kufcoricalekvár komplexet egy súlyrész ku^ koricalekvár (50% átlagos szárazjanyagtartalommal számítva) 1,5—í2,5 súlyrész vízzel való hígítása, az elegy 40—60 C°-ra való melegítése, 0,001—0,003 súlyrész 5,6-dimeffilbenzimidazol hozzáadása és az elegy 15—20 percig 40—60 C°-on való melegítése útján állítjuk elő. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentlének 11—12 pH értékre történő lúgosítását 20—40 C° hőmérsékleten nátrium- vagy kalciumhidroxiddal végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentlé pH értékének 6—8-ria való állítására ferrikloridot alkalmazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7207187. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5
