159347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hasnyálmirigyek extrahálására

MAGTÁR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. XI. 20. (OA—431) Hollandiai elsőbbsége: 1968. XI. 20. (68 16 599) Közzététel napja: 1971. IH. 16. Megjelent: 1972. V. 31. 159347 Nemzetközi osztályozás: A 61 k 17/04 Feltaláló: De Vries Jan Willem vegyész, Oss, Hollandia Tulajdonos: N. V. Organon, Oss, Hollandia Eljárás hasnyálmirigyek extrahálására A találmány tárgya eljárás inzulin kivonására hasnyálmirigyekből az inzulint oldó, megsavanyított oldószerrel. A hasnyálmirigy extrahálását kénsavval raegsavainyított, 'előnyösen kb. 2,4—6,2 pH értékű oldószerrel végezzük, ezután az extakeiós etegyhez előnyösen 2 pH eléréséig sósavat adunk, és így folytatjuk az extrahálást. így nagy mennyiségű fehérjét különíthetünk el, az extraktumot könnyen elválaszthatjuk ia sejtmaradványaktái, átlátszó kivonatot kapunk, és az inaktív fehérje-csapadékot, amely akkor válik le, ha az extraktum pH-ját 8-ra állítjuk be, igen rövid idő alatt kiszűrhetjük. Inzulin elkülönítése céljából a hasnyálmirigyek extrakeiójáboz megsavainyított vizes szerves oldószert, az esetek legtöbbjében etanolt alkalmaztak. A hasnyálmirigyek víztartalmát figyelembe véve általában 50—©0% alkoholtartalmú oldatokat használtaik fel. Az extrakciót általában 3—5-ös pH-jú oldattal végezték, és a művelet kb. 2—3 órát vett igénybe. Savként mind szerves, mind szervetfen savakat alkalmazták. Az előbbi vegyületcsoport hátránya, hogy az alacsony, pl. 2-es pH-érték beállításához igen sok savra van szükség. Ugyanez a hátrány jelentkezik a gyenge szervetlen savak esetében is. Az extrakeióhoz általában sósavtat, kénsavat vagy foszforsavat használtaik fel. Az extrafcció előtt a fagyasztott hasnyálmirigyeket megőrölték vagy feldarabolták^ majd keverés közben kb. a [hasnyálmirigy térfogatának kétszeresét kitevő, hígított, megsavanyított alkoholban szuszpendálták. Az alkohol koncentrációját úgy választották meg, hogy a végső elegy lalkoholtlartalma kb. 60—70 térf.% legyen. Ezután az elegy pH-ját általában 2—Snra állították be a megfelelő savval, imajd a szuszpanziót kb. 10 C°-<on 1—3 órán át keverték. A sejtmaradványok elkülönítése céljából az elegyet, adott esetben szűrést elősegítő anyag jelenlétében 'centrifugálták. A centrifugálást addig végezték, amig a lehető legtisztább kivonat képződött. Tekintettel, ama, hogy így a centrilfugálás igen hosszú időt venne igénybe, és ez gazdaságtalan, a gyakaríllatban a nehezen centrifugálható kivonatokat la szükségesnél rövidebb időig centrifugálták. Ennek következtében a savas kivonat általában centrifugálás utátn is tartalmazott finoman eloszlatott séjtmaradványokat és viszkózus anyagokat. Szük-25 ség van tehát olyan extrakciós eljárás • kidolgozására, melynek során rövid ideig tartó centrifugálás után is igen tiszta kivonatot kapunk. A centrifugálással. elválasztott sejtmaradványokat rendszerint néhányszor újra extrahálták. 30 A kapott kivonat pH-ját tömény ammóniával 10 15 20 159347