159304. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú tripszininhibitor és kallikrein inhibitor hatású polipeptid előállítására
5 159304 6 majd 10 ml 0,05 M pH 7-es nátriumfoszfát pufferrel kiegyensúlyozott Amberlite XE 64 gyanta-oszlopon engedjük át. A gyantaoszlopot vízzel mindaddig mossuk, amíg az átfolyó lé foszfát ionokat már nem tartalmaz. Ezután 100 5 ml 0,1 N H2S0 4 -et tartalmazó 50 t/t%-ois vizes etanollal eluáljuk a hatóanyagot az oszlopról. Az eluátumot pH 3-ra állítjuk és 400 ml acetonnal kicsapjuk az aktív polipeptidet. A leülepedett csapadékot másnap centrifugálással 10 elkülönítjük és vízben oldjuk. Az oldat 6 TIE és 150 000 KIE aktivitást tartalmaz 17 TIE/g fehérje tisztaságban. 3. példa: 15 Marhaparotisból készült 100 ml tisztított kallikrein4nhi!bitor és tripszin-inhibitor tartalmú vizes oldatot, amely 0,011 TIE/ml aktivitást tar- 20 talmaz 8 TIE/g fehérje tisztaságban, átengedünk 10 ml ammónia-ciklusban levő karboximetilcellulóz oszlopon. Az oszlopot 200 ml vízzel mossuk, majd 50 ml 10 t/t% hangyasavat tartalmazó 50 t/t%-ois vizes metanollal leoldjuk a hatóanyagot. Az eluátumot 10%-os, NH4OH-val pH 5-re állítjuk és 250 ml aceton hozzáadásával kicsapjuk a polipeptidet. A csapadékot másnap szűréssel elkülönítjük, 100 ml ace-25 tonnái a szűrőn átmossuk, majd 50 ml vízben oldjuk. A vizes oldat 2,02 TIE/ml aktivitást tartalmaz 18 TIE/g fehérje tisztaságban. Szabadalmi igénypont: Eljárás nagytisztaságú és -töménységű kallikrein-inhibíitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptid előállítására tisztított állati szervkivonatból, a polipeptidnek semleges vagy gyengén bázisos közegből, gyengén savanyú katiioncserélő műgyantán vagy cellulózon való megkötése, majd ásványi savat vagy erős szerves savat tartalmazó, 3 alatti pH-jú, poláris oldószerrel való leoldása útján, azzal jellemezve, hogy a fenti módon megkötött polipeptidet a kationcserélő műgyantáról vagy cellulózról ásványi savat, célszerűen sósavat, kénsavat vagy foszforsaivat, vagy erős szerves savat, célszerűen hangyasavat vagy ecetsavat tartalmazó, 3 alatti pH-jú, 10—50 t/t% vízzel hígított, legfeljebb négy szénatomot tartalmazó alkohollal, célszerűen metanollal vagy etanollal, vagy ketonnal, célszerűen aoetonnal oldjuk le, majd további, legfeljebb négy szénatomot tartalmazó alkohol, célszerűen metanol vagy etanol, vagy keton, célszerűen aceton hozzáadásával a hatóanyagot az oldatból kicsapjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 7207177. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
