159304. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú tripszininhibitor és kallikrein inhibitor hatású polipeptid előállítására

MAGTÁR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1969. XI. 05. (GO—1110) Közzététel napja: 1971. III. 16. Megjelent: 1972. IV. 30. 159304 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/026; A 01 k 19/02 Feltalálók: Dr. Cseh György orvos, Dr. Kelemen Ágnes gyógyszerész, Dr. Tolnay Pál vegyészmérnök, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás nagytisztaságú tripszin-inhibitór és kallikmm-inhibitOT hatású poüpeptid előállítására A találmány tárgya eljárás nagytisztaságú és töménységű tripszin-inhibitór és kallikí«in-inhibitor hatású poüpeptid előállítására tisztított szervkivonatból. 5 Ismeretes, hogy számos állati szerv, így például tüdő, máj, pankreász, lép, vese, parotis, submaxilläris mirigy, gyomor, bél, izom, tartalmaz tripszin-inhibitór és kallikrein-inhilbitor hatású polipeptideket. Ezek a polipeptidek te- 10 rápiásan jól alkalmazhatók a pancreatitis kezelésében, hasi műtéteknél profilaktikusan, valamint egyes véralvadási rendellenességek esetében. A terápiás alkalmazásra kerülő készítménnyel szemben fontos követelmény, hogy 15 megfelelő tisztaságú és töménységű legyen. Számos eljárás ismeretes ilyen hatóanyagokat tartalmazó, tisztított állati szervkivonatok tovébbtisztítására. A nagytisztaságú készítmény előállítására előnyösen használhatók az ion- 20 cserélők. Ezekben specifikusan megkötve és leoldva tisztítható a bázisos polipeptid-típusú hatóanyag. Az 1168 605 számú és az 11818Ö9 számú 25 NSZK közzétételi iratok szerint gyengén savanyú kationcserélőn kötik meg a tripszin-inhibitór és kallikrein-inihibitor hatású polipeptidet, majd arról vizes savoldattal 2,1 maximális pH-értéknél oldják le. A leoldáshoz használt 30 savat anioncserélővel távolítják el az oldatbői, vagy a savanyú eluátumot lúggal semlegesítik, és a képződő sót gélszűréssel különítik el. Az 1184 808 számú NBZK közzétételi irat értelmében a tripszin-inhibitór és kallikreininhibitor hatású polipeptidet kationcserélő karboximetilcellulözon kötik meg, hígított pufferoldattal a szennyezőanyagok egy részét eltávolítják, majd a hatóanyagot tömény elektrolítoldattal végzett grádiens-elueióval oldják le. A termék sómentesítését gélszűréssel végzik. A fenti módszerek mevalósítása több szempontból hátrányos. Az 1 168 605 számú és az 1181859 számú NSZK közzétételi iratok szerinti eljárásban a hatóainyagot a kationcserélőről 4-szeres térfogatú 0,2 n HCl-val oldják le. A nagymennyiségű sav elkülönítése anioncserélővel történik, és ez újabb 60% térfogatnövekedést eredményez. Lúggal történő semlegesítés esetén a keletkező só elkülönítése gélszűréssel még az előbbinél is nagyobb térfogatnövekedéssel jár, maga a gélszűrés pedig üzemi méretben költséges és nehezen megvalósítható. A felhígult hatóanyagoldatot vákuumban 40—45 C°-on bepárlással töményítik be a szükséges töménységre. Ez a művelet semleges oldatban hatóanyagveszteséget okoz. Az eljárások hátránya a fentieken kívül az, hogy a kapott termék tisztasága nem éri el a kívánt fokot. 159304