159302. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polimixin B sók előállítására
9 159-302 10 Az így kapott eluá'tuimot azután lassú áramban 200 liter acetomba csurgatjuk, amelybe előzőleg 1100 gramm konc. kénsavat és 2000 g trietilaimint adagoltunk. A keletkező polimixin B szulfátot ezután szűréssel elkülönítjük és vákuumban 60 C°-on súly állandóságig szárítjuk. Összesen 4,96 kg 6420 E/mg aktivitású polimixin B szulfátot kapunk. Hamutartalma: 3,2%; (a)2oD = ^68° (1%, víz). 2. példa: A kapott polimixin BH /?-n aiftelinszulforiát első és másodiik generációját (844 g) ezután 4000 ml 60%-os vizes etanolban melegítés közben feloldjuk, majd az oldatot állandó keverés közben 40 liter olyan acetomba csurgatjuk, melybe előzőleg 180 g konc. kénsavat és 330 g trietilaimint adagoltunk. A kitvált hófehér poliimixin B szulfátot ezután szűréssel elkülönítjük, 2 x 3 liter acetonnal átmoíssuk és vákuumban 60 C°Ton P2 '0 5 felett súlyállandóságig szárítjuk. Összesen 5Í72 g 7556 E/mg aktivitású polimixin B szulfátot kapunk. Hamutartalma: 0,0%. (a)20 D = —-80° (1%, víz). Elemi analízise: C: 44,2%, H: 6,36%, N: 14,0%, SO4: 19,7%. 3. példa: 1000 liter 6800 E/ml polimixin B-t tartalmazó fermentléhez pH = 8,0 értéken, állandó keverés közben 50 kg ólomacetátot adunk, majd az elegyet 1 óra hosszat tartó keverés után leszűrjük. A szűrőberendezésen maradt sejttömeget 100 liter vízzel átmossuk. A kapott szűrlet pH-ját 5 n kénsavval 3,5-re állítjuk be, és az ólomszuMát alakjában kivált felesleges ólmot tartalmazó csapadékot szűréssel elkülönítjük, majd a csapadékot 100 liter vízzel átmossuk, így összesen 1060 liter 5000 E/ml polimixin B-t tartalmazó szűrletet kapunk. Az így kapott szűrletből a poliimixin B elkülönítését az 1. példában leírt módon végezzük. 4. példa: 1O00 liter 7000 E/ml polimixin B-t tartalmazó oldathoz 20 kg oxálsavat adunk, majd az elegyet állandó keverés köziben 100 C°-ra melegítjük, és 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten tartjuk. A savas fermentlé térfogatát ezután vízzel 1200 literre egészítjük ki, és a forró fermentlevet megszűrjük. A szűrőn maradt sejttömeget 100 liter 1%-os vizes oxálsavoldattal átmoslsuk. Összesen 1180 liter 5500 E/ml polimixin B-t tartalmiazó oldatot kapunk. Az így kapott szűrletből a polimixin B elkülönítését az 1. példában leírt módon végezzük. 5. példa: Az 1. példa szerinti módon előállított és 5,6 pH-jú szűrt fermentlé 2000 literjét (5800 E/ml) 3 db sorbalkapcsolt, egyenként 5—5 liter Amberlite IRC 50 jelzésű kationoserélő gyanta nátrium formáját tartalmazó oszlopon folyatjuk át 30 liter/óra sebességgel. Az utolsó oszlopon átfolyó lé ml-enként 160 E polimixin B-t tartalmaz. A megkötés során az első oszlop 545, a második 375, míg a harmadik 170 g polimixin B-t köt meg. A fenti 3 oszlopnak az 1. példában megadott módon végzett eluálásánál összesen 12,8 liter 800 000 E/ml polimixin B-t tartalmazó etluátumot kapunk. Ezt az eluátumot 80 liter 600 g trietilamint tartalmazó acetonba öntve 1480 g 6150 E/mg-os polimixin B-t tartalmazó eluátumöt kapunk. Ezt az elu-2. példa szerinti módon eljárva 1380 g 5060 E/mg-os polimixin B-/?-naftalinszulfonátot kapunk. 6. példa: A 2. példa szerinti módon előállított 100 g 520O E/mg polimixin B-tartalmú /?-naftalin-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1 kg, az 1. példa szerinti módon kapott polimixin B szulfátot 5000 ml 80 C°-os vízben szuszpendálunk, majd ezen a hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük, és a meleg oldatot megszűrjük. A minimális mennyiségű oldhatatlan csapadékot 500 ml forró vízzel átmossuk. A kapott 5450 ml 1 140 000 E/ml-es oldathoz ez- Q után 1,15 kg /J-naftalinszulfonsavnak 2,4 liter vízben készült oldatát öntjük. A kivált polimixin B-/?-naftalinszulfonátot a vizes fázistól elkülönítjük (a vizes fázis 1800 E/ml polimixin B-t tartalmaz), majd az 1000 ml vízzel kimosott ß-naftalinszulfonatot 8000 ml 90%os vizes etanolban 70—75 C°-on 1 órán keresztül keverjük. A kapott oldatot melegen szűrjük, és a szűrőn maradó minimális menynyiségű oldhatatlan csapadékot 500 ml forró kb. 70—75 C°-ű 90%-os vizes etanollal átmos- 30 suk. Összesen 8400 ml 715 000 E/ml polimixin B-t tartalmazó oldatot kapunk. Ehhez az oldathoz ezután 150 g Norit jelzésű aktívszenet adunk, 30 percen át 70 C°-on keverjük, majd melegen megszűrjük, és a szenet 2x250 ml 35 forró, 90%-os etanollal átmossuk. A kapott 8900 ml 670 000 E/ml-es oldathoz ezután 18 liter meleg, 70 C°-ios absz. etanolt adunk, és az elegyet lassan, 10—,12 óra alatt 0 C°-ra hűtjük. 24 órán át 0 C°-on történő kristályo- 40 sodás után a kivált hófehér színű polimixin B^-naftalinszuMonátot leszűrjük, és 500 ml jéghideg 0 C°^ú absz. etanollal átmossuk. Így 752 g 5200 E/mg polimixin B-t tartalmazó kristályos /?-naftalinszulfonátot kapunk. Hamu tar- 45 taima: 0,05%. Ezután a kristályosítási anyalúgot vákuumban 8 literre pároljuk be, majd a párlási maradékot 0 C°-ra hűtjük, és a kivált polimixin B^-naftalinszulfonát második generációját szűréssel elkülönítjük. Így 92 g 50 5120 E/mg polimixin B-t tartalmazó anyagot kapunk; hamutartalma: 0,12%. 5
